【正文】 2 —蒸餾水（mL） — — — 2稀釋唾液酶（mL） （2）混勻后，將各管置于37℃水浴8分鐘后，取1號(hào)管中混合液1滴于點(diǎn)滴板上，加1滴KII2溶液顯色，以檢驗(yàn)淀粉的水解程度。例如Cu2+是唾液淀粉酶的抑制劑。人體內(nèi)大多數(shù)酶的最適溫度在37℃左右。教學(xué)重 點(diǎn)與難點(diǎn)重點(diǎn)：唾液淀粉酶催化的酶促反應(yīng)；淀粉水解程度的判斷。二、實(shí)驗(yàn)步驟▲：1．點(diǎn)樣 選取制備好的薄板一塊， 的直線上均勻選4個(gè)點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)材料四種糖樣品、染色液、擴(kuò)展劑、層析缸、層析板等實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、實(shí)驗(yàn)原理★：薄層層析(簡(jiǎn)稱TLC)是在吸附層析基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種微量而快速的層析法，它是在吸附劑或支持劑均勻涂布的薄層上進(jìn)行的，故稱薄層層析。觀察現(xiàn)象，記錄。觀察沉淀的再溶解。放置片刻，傾去上清液，向沉淀中加入少量的水，沉淀是否溶解？為什么？ 某些有機(jī)酸沉淀蛋白質(zhì) 取1支試管，加入蛋白質(zhì)溶液2mL，再加入1mL5%三氯乙酸溶液，振蕩試管，觀察沉淀的生成。 如球蛋白可在半飽和硫酸銨溶液中析出，而清蛋白則在飽和硫酸銨溶液中才能析出。二、實(shí)驗(yàn)步驟：（一）酪蛋白等電點(diǎn)的測(cè)定（1）取同樣規(guī)格的試管4支，按下表順序分別精確地加入各試劑，然后混勻。（1） 可逆的沉淀反應(yīng) 此時(shí)蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)尚未發(fā)生顯著變化，除去引起沉淀的因素后，蛋白質(zhì)的沉淀仍能溶解于原來(lái)溶劑中，并保持其天然性質(zhì)而不變性。主要參考資料[1] 《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，2013[2]《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》，董曉燕主編，化學(xué)工業(yè)出版社，2010總結(jié)分析讓學(xué)生掌握糖顯色反應(yīng)的原理；給學(xué)生強(qiáng)調(diào)注意觀察各管顏色變化的時(shí)間《醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》教案第 3次課 2學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 蛋白質(zhì)等電點(diǎn)和沉淀反應(yīng)實(shí)驗(yàn)性質(zhì)基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn) 教學(xué)目的和要求。間苯二酚反應(yīng)：取3支試管，分別加入1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1% mL。醛糖在同樣條件下呈色反應(yīng)慢。表1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線制作管 號(hào)1mg/ml葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液(mL)蒸餾水(mL)DNS(mL)葡萄糖含量(mg)光密度值(OD540nm)1002345607（未知濃度還原糖）0將各管搖勻，在沸水浴中準(zhǔn)確加熱5min取出，冷卻至室溫，用蒸餾水補(bǔ)足至5mL，加塞后顛倒混勻，在分光光度計(jì)上進(jìn)行比色。實(shí)驗(yàn)材料（1）1mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸餾水溶解后，以蒸餾水定容至100mL。難點(diǎn)：標(biāo)準(zhǔn)曲線的應(yīng)用。黃色 桔紅色二、實(shí)驗(yàn)步驟：，按表1分別加入濃度為1mg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液、蒸餾水和DNS試劑，配成不同濃度的葡萄糖反應(yīng)液。此反應(yīng)是酮糖的特異反應(yīng)。觀察、記錄各管顏色。蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)可分為兩類。因此變性蛋白質(zhì)并不一定都表現(xiàn)為沉淀，而沉淀的蛋白質(zhì)也未必都已變性。鹽的濃度不同，析出的蛋白質(zhì)也不同。取1支試管，加入蛋白質(zhì)溶液2mL，再加3%硝酸銀溶液1—2滴，振蕩試管，有沉淀產(chǎn)生。觀察各管顏色的變化和沉淀的生成。 Tyr（Trp）+濃硝酸黃色 Phe+少量濃硫酸+濃硝酸黃色 （半胱氨酸和胱氨酸） RSH+2NaOHROH+Na2S+H2ONa2S +Pb2+PbS+2Na+PbS+2HCl PbCl2+H2S二、實(shí)驗(yàn)步驟▲：(biuret reaction) 取1支試管，加乳蛋白溶液（蛋清:水=1:9）約1mL和10%NaOH約2mL，搖勻，再加1%CuSO4溶液2滴，隨加隨搖。難點(diǎn)：掌握分配系數(shù)，Rf值。而且薄層層析法操作方便，設(shè)備簡(jiǎn)單，所以薄層層析法目前應(yīng)用范圍相當(dāng)廣泛。教學(xué)過(guò)程中師生活動(dòng)設(shè)計(jì) 還有哪些層板方法？提綱、板書(shū)設(shè)計(jì) 原理及簡(jiǎn)要操作步驟作業(yè) 何謂Rf值？Rf值與什么因素有關(guān)？主要參考資料[1]《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》，董曉燕主編，化學(xué)工業(yè)出版社，2010[2]《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教程》，王金亭，方俊主編，華中科技大學(xué)出版社，2010總結(jié)分析 點(diǎn)樣是本實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵，教師在指導(dǎo)學(xué)生操作時(shí)，強(qiáng)調(diào)點(diǎn)樣要輕、快，穩(wěn)、小并且點(diǎn)樣點(diǎn)要集中； 放展板時(shí)，點(diǎn)樣點(diǎn)不要浸如展層溶液中《醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》教案 第 6次課 2學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 酶的特性 實(shí)驗(yàn)性質(zhì)基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn) 教學(xué)目的和要求掌握酶促反應(yīng)速度的幾個(gè)主要影響因素了解淀粉水解程度的鑒定。溫度繼續(xù)升高，反應(yīng)速度反而下降。 凡是能夠降低酶的活性，使酶促反應(yīng)速度減慢，又不使酶變性的物質(zhì)稱為酶的抑制劑。（1）取試管4支，編號(hào)，按下表依次加入各種試劑。Folin酚試劑中的磷鉬酸鹽磷鎢酸鹽被蛋白質(zhì)中的酪氨酸和苯丙氨酸殘基還原，產(chǎn)生深蘭色（鉬蘭和鎢蘭的混合物）。：取1毫升樣品溶液（其中約含蛋白質(zhì)20~250微克），按上述方法進(jìn)行操作，取1毫升蒸餾水代替樣品作為空白對(duì)照。教學(xué)重 點(diǎn)與難點(diǎn)重點(diǎn)：掌握醋酸纖維薄膜電泳的操作方法。醋酸纖維薄膜電泳(CAME)是一種區(qū)帶電泳技術(shù)，將血清樣品點(diǎn)樣于醋纖膜上，在pH8．6的緩沖液中電泳時(shí)，血清蛋白質(zhì)均帶負(fù)電荷移向正極。血清中含有清蛋白、α球蛋白、β球蛋白、γ球蛋白和各種脂蛋白等，各種蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中的遷移速度不同。用蓋玻片蘸一點(diǎn)血清，使血清均勻地分布在蓋玻片切面。5．漂洗：將膜條從染色液中取出，在培養(yǎng)皿的邊緣上瀝去表面多余的染色液，依次放入裝有漂洗液的培養(yǎng)皿（共有2套）中漂洗2次（未漂洗時(shí)注意蓋好培養(yǎng)皿的蓋子，以免溶劑揮發(fā)），至色帶清晰的電泳圖譜。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、實(shí)驗(yàn)原理★：丙酮酸可與2，4二硝基苯肼在酸性溶液中反應(yīng)形成相應(yīng)的2，4二硝基苯腙，呈黃色，后者在堿性條件下呈紅棕色。當(dāng)用此染料滴定含有Vc的酸性溶液時(shí)，在Vc未全部氧化前，滴下的染料立即被還原成無(wú)色；一旦溶淀中的Vc全部被氧化時(shí)，則滴下的染料立即使溶液顯示粉紅色，此時(shí)即為滴定終點(diǎn)，表示溶液中的Vc剛剛被氧化完全。在乙醇提取液中加磷硫鐵試劑、膽固醇試劑產(chǎn)生紫紅色化合物，顏色深淺與膽固醇總量成正比，可用分光光度計(jì)法測(cè)定。利用等電點(diǎn)時(shí)溶解度最低的原理，酪蛋白就沉淀出來(lái)。主要參考資料[1]《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》，董曉燕主編，化學(xué)工業(yè)出版社，2010[2]《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教程》，王金亭，方俊主編，華中科技大學(xué)出版社，2010課后自我總結(jié)分析 學(xué)習(xí)離心機(jī)的使用； 等電點(diǎn)的調(diào)節(jié)直接影響得率，PH要調(diào)節(jié)準(zhǔn)確《醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》教案 第 13次課 2學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 卵磷脂的提取與鑒定實(shí)驗(yàn)性質(zhì)基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn) 教學(xué)目的和要求。二、實(shí)驗(yàn)步驟 稱取約10g煮熟雞蛋黃于研缽中，分3次加入30mL丙酮（每次10mL）充分研磨均勻，漏斗過(guò)濾，留濾渣，加入溫?zé)岬?5%乙醇30mL，邊加邊攪拌均勻，并靜置10min，冷卻后過(guò)濾得澄清透明黃色乙醇溶液。教學(xué)過(guò)程中師生活動(dòng)設(shè)計(jì) 卵磷脂的生理作用提綱、板書(shū)設(shè)計(jì)原理及簡(jiǎn)要操作步驟作業(yè)？？主要參考資料[1]《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》，董曉燕主編，化學(xué)工業(yè)出版社，2010[2]《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教程》，王金亭，方俊主編，華中科技大學(xué)出版社，2010總結(jié)分析講解原理時(shí)，讓學(xué)生了解卵磷脂的作用；丙酮研磨要徹底，得到的卵磷脂純度更高；檢驗(yàn)的過(guò)程要仔細(xì)觀察現(xiàn)象《醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》教案 第 14 次課 2學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 酵母RNA提取及鑒定 實(shí)驗(yàn)性質(zhì)基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn) 教學(xué)目的和要求了解RNA的組分掌握鑒定RNA組分的方法教學(xué)重 點(diǎn)與難點(diǎn)重點(diǎn)：離心機(jī)的使用方法：實(shí)驗(yàn)中各試劑的用處難點(diǎn)：RNA的組分和鑒定方法實(shí)驗(yàn)材料（1）試劑：、酸性乙醇溶液、95%乙醇、濃硫酸、濃氨水、三氯化鐵濃鹽酸溶液、苔黑酚乙醇溶液、鉬酸銨溶液、抗壞血酸（2）器材：離心機(jī)、托盤(pán)天平、恒溫水浴鍋、錐形瓶、試管、試管架實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、實(shí)驗(yàn)原理★:（酵母片中酵母為休眠體，在溫度、。后用硫酸水解RNA得核糖、磷酸和堿基組分，分別用定糖法、定磷法和嘌呤銀反應(yīng)鑒定?！?，加入水解液1mL和定磷試劑1mL，混勻，在沸水浴中加熱，注意觀察溶液顏色的變化，溶液變藍(lán)，說(shuō)明磷酸存在▲。 ▲ a)溶解DNA：用玻璃棒挑出白色絮狀DNA轉(zhuǎn)移到另一試管中，加1ml 2 mol/L的Nacl溶液使DNA溶解以液體形式呈現(xiàn)，