【正文】 三、實(shí)驗(yàn)分析▲ 加入白色絮狀物的試管中顏色變?yōu)樗{(lán)色，另一對(duì)照試管中沒有顏色變化，說(shuō)明提取出了菜花中的DNA。器材：量筒、剪刀、研缽、恒溫水浴鍋、電爐、漏斗。，平衡、離心（4000r/min）3min。本法采用稀減法來(lái)提取變性的RNA。將加熱過的溶液過濾，濾液供下面檢驗(yàn)。溶劑蛋白質(zhì)脂肪卵磷脂腦磷脂乙醇不溶溶溶不溶氯仿不溶溶溶溶丙酮不溶溶不溶不溶新提取的卵磷脂為白色，當(dāng)與空氣接觸后，其所含不飽和脂肪酸會(huì)被氧化而使卵磷脂呈黃褐色。將上述懸浮液冷卻至室溫。取消耗體積的平均值，記下體積V樣三、樣品VC濃度的計(jì)算▲：經(jīng)草酸稀釋后的辣椒勻漿中VC濃度為：每100g純辣椒中含VC的mg數(shù)為：注意：整個(gè)實(shí)驗(yàn)要迅速，以防VC氧化。人血清的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶正常值為2~40U。教學(xué)重 點(diǎn)與難點(diǎn)重點(diǎn)：血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測(cè)定的原理。膜條光面朝上，點(diǎn)樣端靠近負(fù)極、且懸空（可用鑷子再將膜條兩端壓服帖一些）。：用鑷子取醋酸纖維薄膜2張，識(shí)別出光澤面與粗糙面，將粗糙面朝上放在電泳槽中的緩沖液中浸泡20min。本實(shí)驗(yàn)以醋酸纖維素為電泳支持物，它是纖維素的羥基乙?；纬傻睦w維素醋酸酯，將它溶于有機(jī)溶劑（如：丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后，涂抹成均勻的薄膜則成為醋酸纖維素薄膜。2． 染色液：氨基黑10B ，用甲醇50mL、冰醋酸10mL、水40mL溶解（可重復(fù)使用）。根據(jù)所測(cè)樣品的吸光度值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的蛋白質(zhì)量，從而計(jì)算出樣品溶液的蛋白質(zhì)濃度▲。（Folin酚試劑），同樣立即混勻。教學(xué)過程中師生活動(dòng)設(shè)計(jì) 隨著淀粉水解，為什么與碘有顏色反應(yīng)變化？提綱、板書設(shè)計(jì) 原理及簡(jiǎn)要操作步驟作業(yè) 1在作離子對(duì)酶活的影響時(shí)4號(hào)管有何作用？？？主要參考資料[1]《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》，董曉燕主編，化學(xué)工業(yè)出版社，2010[2]《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教程》，王金亭，方俊主編，華中科技大學(xué)出版社，2010總結(jié)分析對(duì)照實(shí)驗(yàn)要注意同步性；不同人的唾液淀粉酶活性不盡相同，讓學(xué)生注意到樣本差異；重點(diǎn)分析激活劑和抑制劑對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響《醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》教案 第 7次課 2學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 Folin酚試劑法測(cè)蛋白質(zhì)濃度 實(shí)驗(yàn)性質(zhì)綜合性實(shí)驗(yàn) 教學(xué)目的和要求1. 學(xué)習(xí)會(huì)用Folin酚試劑法測(cè)蛋白質(zhì)濃度的方法。 溫度對(duì)酶促反應(yīng)速度影響實(shí)驗(yàn)加樣表管號(hào) 1 2 3 ％淀粉溶液（mL） 稀釋唾液 （ml） 1 1 1煮沸唾液 — — 1搖勻水浴溫度 37℃ 0℃ 37℃（2）水浴8min后，向各管中各滴加1滴KII2溶液，混勻，觀察各管顏色并解釋結(jié)果▲（1）取試管3支，編號(hào)，按下表依次加入各種試劑。當(dāng)酶促反應(yīng)速度達(dá)到最大值時(shí)的溶液pH值，稱為該酶的最適pH。試劑：%、%淀粉液、%NaCl、%NaCl溶液、1%CuSO4溶液、1%Na2SOpH=、pH=、pH=。2．展層 將薄板置于盛有層析溶劑的層折缸中，自下向上展層，當(dāng)展層溶劑到達(dá)離薄板頂端約1cm 處時(shí)取出薄板，在溶劑前沿處作一記號(hào)，于80℃下烘干5min。糖是多羥基化合物在硅膠G薄層上展層時(shí)，被吸附的強(qiáng)弱有差異，同時(shí)在展開劑中溶解性質(zhì)也有差異。然后冷卻至20~30℃，加10滴濃HCL，再將濕潤(rùn)的醋酸鉛試紙放于管口，加熱，嗅其氣味同時(shí)觀察試紙顏色變化。觀察沉淀的生成（如果沉淀不明顯，加點(diǎn)NaCl，混勻。倒出少量混濁沉淀，加少量水，觀察是否溶解，為什么？將管內(nèi)容物過濾，向?yàn)V液中添加硫酸銨粉末到不再溶解為止。觀察其混濁度。（2） 不可逆沉淀反應(yīng) 此時(shí)蛋白質(zhì)分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)發(fā)生重大改變，蛋白質(zhì)常變性而沉淀，不再溶于原來(lái)溶劑中。教學(xué)重點(diǎn)與難點(diǎn)重點(diǎn)：學(xué)習(xí)測(cè)定蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的方法及沉淀蛋白質(zhì)的方法。托倫反應(yīng)：取3支試管，分別加入1%阿拉伯糖溶液、1%半乳糖溶液、1% mL，再向各管分別加入托倫試劑1 mL，混勻。二、操作步驟▲： α—萘酚反應(yīng)：先取3支試管，分別加入1%葡萄糖溶液、1%淀粉溶液、1%蔗糖溶液，然后向3支試管中各加入2滴莫氏試劑，混勻。計(jì)算7號(hào)管還原糖的百分含量。2. 材料 小麥淀粉或玉米淀粉?！夺t(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》教案第 1 次課 2學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 3，5二硝基水楊酸法（DNS法）測(cè)定還原糖 實(shí)驗(yàn)性質(zhì)設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)教學(xué)目的和要求了解糖的還原性掌握還原糖定量測(cè)定的原理和方法。3. 器材 分光光度計(jì)，天平，水浴鍋，電爐，試管若干等。三、結(jié)果與計(jì)算▲：計(jì)算出7號(hào)管光密度值的平均值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上分別查出相應(yīng)的還原糖毫克數(shù)，按下式計(jì)算出樣品中還原糖和總糖的百分含量。另外取1支試管，只加2滴莫氏試劑作為空白對(duì)照，傾斜4支試管， mL，慢慢立起試管 ，切勿搖動(dòng)。將3支試管同時(shí)置于沸水浴中，觀察、記錄顏色的變化及顏?zhàn)兓臅r(shí)間。難點(diǎn)：蛋白質(zhì)變性與沉淀的關(guān)系，沉淀的蛋白質(zhì)不一定表現(xiàn)為變性；變性的蛋白質(zhì)不一定表現(xiàn)為沉淀。加熱引起的蛋白質(zhì)沉淀與凝固。靜置10分鐘后，再觀察其混濁度。此時(shí)析出沉淀為清蛋白。 乙醇引起的變性與沉淀 取3支試管，編號(hào)。教學(xué)重 點(diǎn)與難點(diǎn)重點(diǎn)：蛋白質(zhì)與氨基酸的顯色反應(yīng)原理。教學(xué)過程中師生活動(dòng)設(shè)計(jì) 含苯環(huán)的氨基酸有哪些？雙縮脲反應(yīng)顏色與什么相關(guān)？提綱、板書設(shè)計(jì) 原理及簡(jiǎn)要操作步驟作業(yè) ？？主要參考資料[1]《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，2013[2]《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教程》，王金亭，方俊主編，華中科技大學(xué)出版社，2010總結(jié)分析 實(shí)驗(yàn)過程中讓學(xué)生重點(diǎn)觀察顏色變化的過程； 醋酸鉛反應(yīng)的每一步都要記錄現(xiàn)象《醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》教案 第 5次課 2學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 糖的薄層層析 實(shí)驗(yàn)性質(zhì)基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn) 教學(xué)目的和要求。吸附力主要與糖的相對(duì)分子質(zhì)量和羥基數(shù)有關(guān)，一般為三糖〉二糖〉單糖，醛糖〉酮糖〉脫氧糖。3．顯色 除盡溶劑后，向薄層板上噴霧糖顯色劑，于80℃下烘干10min，則各種糖分別顯出不同的顏色。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、實(shí)驗(yàn)原理★：溫度與酶促反應(yīng)速度關(guān)系密切。不同的酶最適pH值不盡相同。 pH對(duì)酶促反應(yīng)速度影響實(shí)驗(yàn)加樣表管號(hào) 1 2 3％淀粉液（mL） 2 2 2PH （mL） 3 — —PH （mL） — 3 —PH （mL） — — 3稀釋唾液酶（mL） 2 2 2（2）混勻后，將各管置于37℃水浴5分鐘后，取2號(hào)管中混合液1滴于點(diǎn)滴板上，加1滴KII2溶液顯色，以檢驗(yàn)淀粉的水解程度。2. 鞏固分光光度計(jì)的使用。這一步混合速度要快，否則會(huì)使顯色程度減弱。教學(xué)過程中師生活動(dòng)設(shè)計(jì) 測(cè)定蛋白質(zhì)濃度其他方法有哪些？提綱、板書設(shè)計(jì)原理及簡(jiǎn)要操作步驟作業(yè) 簡(jiǎn)述Folin酚試劑法比較其他蛋白質(zhì)測(cè)定方法的優(yōu)點(diǎn)。3．漂洗液：甲醇或乙醇45mL，冰醋酸5mL，水50mL，混勻。該膜具有均一的泡沫狀的結(jié)構(gòu)，厚度約為120 μm，有很強(qiáng)的通透性，對(duì)分子移動(dòng)阻力很小。 ：事先用點(diǎn)樣器在濾紙上點(diǎn)幾個(gè)樣，熟悉一下點(diǎn)樣器的用法。蓋嚴(yán)電泳室，檢查一下電泳槽和穩(wěn)壓電源是否已經(jīng)連接好。難點(diǎn)：血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測(cè)定的方法。二、實(shí)驗(yàn)步驟：試劑測(cè)定管（1）測(cè)定對(duì)照管（2）標(biāo)準(zhǔn)管（3）標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照管（4）ALT底物（mL）37度保溫5min（預(yù)熱，可略）血清（mL）丙酮酸標(biāo)液（200ug/ml)磷酸buffer（mL）混勻，37度保溫30min2,4二硝基苯肼（mL）混勻，37度保溫20minALT底物（mL）（mL）▲以dH2O為空白對(duì)照測(cè)四管的A值▲公式：教學(xué)過程中師生活動(dòng)設(shè)計(jì) 什么是酶的比活力？提綱、板書設(shè)計(jì)原理及簡(jiǎn)要操作步驟作業(yè) 混浴各管后，為何要在10min后，30m