【正文】 具有均一的泡沫狀的結構，厚度約為120 μm，有很強的通透性，對分子移動阻力很小。由于血清中各蛋白組分等電點不同而致表面凈電荷量不等，加之分子大小和形狀各異，因而電泳遷移率不同，彼此得以分離。3．漂洗液：甲醇或乙醇45mL，冰醋酸5mL，水50mL，混勻。難點：電泳技術的原理。教學過程中師生活動設計 測定蛋白質(zhì)濃度其他方法有哪些？提綱、板書設計原理及簡要操作步驟作業(yè) 簡述Folin酚試劑法比較其他蛋白質(zhì)測定方法的優(yōu)點。通常樣品的測定也可與標準曲線的測定放在一起，同時進行。這一步混合速度要快，否則會使顯色程度減弱。在一定的條件下，蘭色深度與蛋白的量成正比。2. 鞏固分光光度計的使用。激活劑和抑制劑對酶促反應速度影響實驗加樣表管號 1 2 3 4％淀粉液（mL） 1％NaCl溶液（mL） 2 — — —1％Na2SO4溶液（mL） — 2 — —1％CUSO4溶液（mL） — — 2 —蒸餾水（mL） — — — 2稀釋唾液酶（mL） （2）混勻后，將各管置于37℃水浴8分鐘后，取1號管中混合液1滴于點滴板上，加1滴KII2溶液顯色，以檢驗淀粉的水解程度。 pH對酶促反應速度影響實驗加樣表管號 1 2 3％淀粉液（mL） 2 2 2PH （mL） 3 — —PH （mL） — 3 —PH （mL） — — 3稀釋唾液酶（mL） 2 2 2（2）混勻后，將各管置于37℃水浴5分鐘后，取2號管中混合液1滴于點滴板上，加1滴KII2溶液顯色，以檢驗淀粉的水解程度。例如Cu2+是唾液淀粉酶的抑制劑。不同的酶最適pH值不盡相同。人體內(nèi)大多數(shù)酶的最適溫度在37℃左右。實驗內(nèi)容一、實驗原理★：溫度與酶促反應速度關系密切。教學重 點與難點重點：唾液淀粉酶催化的酶促反應；淀粉水解程度的判斷。3．顯色 除盡溶劑后，向薄層板上噴霧糖顯色劑，于80℃下烘干10min，則各種糖分別顯出不同的顏色。二、實驗步驟▲：1．點樣 選取制備好的薄板一塊， 的直線上均勻選4個點。吸附力主要與糖的相對分子質(zhì)量和羥基數(shù)有關，一般為三糖〉二糖〉單糖，醛糖〉酮糖〉脫氧糖。實驗材料四種糖樣品、染色液、擴展劑、層析缸、層析板等實驗內(nèi)容一、實驗原理★：薄層層析(簡稱TLC)是在吸附層析基礎上發(fā)展起來的一種微量而快速的層析法，它是在吸附劑或支持劑均勻涂布的薄層上進行的，故稱薄層層析。教學過程中師生活動設計 含苯環(huán)的氨基酸有哪些？雙縮脲反應顏色與什么相關？提綱、板書設計 原理及簡要操作步驟作業(yè) ？？主要參考資料[1]《生物化學實驗》，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，2013[2]《生物化學實驗教程》，王金亭，方俊主編，華中科技大學出版社，2010總結分析 實驗過程中讓學生重點觀察顏色變化的過程； 醋酸鉛反應的每一步都要記錄現(xiàn)象《醫(yī)學生物化學實驗》教案 第 5次課 2學時實驗項目 糖的薄層層析 實驗性質(zhì)基礎性實驗 教學目的和要求。觀察現(xiàn)象，記錄。教學重 點與難點重點：蛋白質(zhì)與氨基酸的顯色反應原理。觀察沉淀的再溶解。 乙醇引起的變性與沉淀 取3支試管，編號。放置片刻，傾去上清液，向沉淀中加入少量的水，沉淀是否溶解？為什么？ 某些有機酸沉淀蛋白質(zhì) 取1支試管，加入蛋白質(zhì)溶液2mL，再加入1mL5%三氯乙酸溶液，振蕩試管，觀察沉淀的生成。此時析出沉淀為清蛋白。 如球蛋白可在半飽和硫酸銨溶液中析出，而清蛋白則在飽和硫酸銨溶液中才能析出。靜置10分鐘后，再觀察其混濁度。二、實驗步驟：（一）酪蛋白等電點的測定（1）取同樣規(guī)格的試管4支，按下表順序分別精確地加入各試劑，然后混勻。加熱引起的蛋白質(zhì)沉淀與凝固。（1） 可逆的沉淀反應 此時蛋白質(zhì)分子的結構尚未發(fā)生顯著變化，除去引起沉淀的因素后，蛋白質(zhì)的沉淀仍能溶解于原來溶劑中，并保持其天然性質(zhì)而不變性。難點：蛋白質(zhì)變性與沉淀的關系，沉淀的蛋白質(zhì)不一定表現(xiàn)為變性；變性的蛋白質(zhì)不一定表現(xiàn)為沉淀。主要參考資料[1] 《生物化學實驗》，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，2013[2]《生物化學實驗》，董曉燕主編，化學工業(yè)出版社，2010總結分析讓學生掌握糖顯色反應的原理；給學生強調(diào)注意觀察各管顏色變化的時間《醫(yī)學生物化學實驗》教案第 3次課 2學時實驗項目 蛋白質(zhì)等電點和沉淀反應實驗性質(zhì)基礎性實驗 教學目的和要求。將3支試管同時置于沸水浴中，觀察、記錄顏色的變化及顏變化的時間。間苯二酚反應：取3支試管，分別加入1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1% mL。另外取1支試管，只加2滴莫氏試劑作為空白對照，傾斜4支試管， mL，慢慢立起試管 ，切勿搖動。醛糖在同樣條件下呈色反應慢。三、結果與計算▲：計算出7號管光密度值的平均值，在標準曲線上分別查出相應的還原糖毫克數(shù)，按下式計算出樣品中還原糖和總糖的百分含量。表1 葡萄糖標準曲線制作管 號1mg/ml葡萄糖標準液(mL)蒸餾水(mL)DNS(mL)葡萄糖含量(mg)光密度值(OD540nm)1002345607（未知濃度還原糖）0將各管搖勻，在沸水浴中準確加熱5min取出，冷卻至室溫，用蒸餾水補足至5mL，加塞后顛倒混勻，在分光光度計上進行比色。3. 器材 分光光度計，天平，水浴鍋，電爐，試管若干等。實驗材料（1）1mg/mL葡萄糖標準溶液：準確稱取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸餾水溶解后，以蒸餾水定容至100mL?！夺t(yī)學生物化學實驗》教案第 1 次課 2學時實驗項目 3，5二硝基水楊酸法（DNS法）測定還原糖 實驗性質(zhì)設計性實驗教學目的和要求了解糖的還原性掌握還原糖定量測定的原理和方法。難點：標準曲線的應用。2. 材料 小麥淀粉或玉米淀粉。黃色 桔紅色二、實驗步驟：，按表1分別加入濃度為1mg/mL的葡萄糖標準液、蒸餾水和DNS試劑，配成不同濃度的葡萄糖反應液。計算7號管還原糖的百分含量。此反應是酮糖的特異反應。二、操作步驟▲： α—萘酚反應：先取3支試管，分別加入1%葡萄糖溶液、1%淀粉溶液、1%蔗糖溶液，然后向3支試管中各加入2滴莫氏試劑，混勻。觀察、記錄各管顏色。托倫反應：取3支試管，分別加入1%阿拉伯糖溶液、1%半乳糖溶液、1% mL，再向各管分別加入托倫試劑1 mL，混勻。教學重點與難點重點：學習測定蛋白質(zhì)等電點的方法及沉淀蛋白質(zhì)的方法。蛋白質(zhì)的沉淀反應可分為兩類。（2） 不可逆沉淀反應 此時蛋白質(zhì)分子內(nèi)部結構發(fā)生重大改變，蛋白質(zhì)常變性而沉淀，不再溶于原來溶劑中。因此變性蛋白質(zhì)并不一定都表現(xiàn)為沉淀，而沉淀的蛋白質(zhì)也未必都已變性。觀察其混濁度。鹽的濃度不同，析出的蛋白質(zhì)也不同。倒出少量混濁沉淀，加少量水，觀察是否溶解，為什么？將管內(nèi)容物過濾，向濾液中添加硫酸銨粉末到不再溶解為止。取1支試管，加入蛋白質(zhì)溶液2mL，再加3%硝酸銀溶液1—2滴，振蕩試管，有沉淀產(chǎn)生。觀察沉淀的生成（如果沉淀不明顯，加點NaCl，混勻。觀察各管顏色的變化和沉淀的生成。 Tyr（Trp）+濃硝酸黃色 Phe+少量濃硫酸+濃硝酸黃色 （半胱氨酸和胱氨酸） RSH+2NaOHROH+Na2S+H2ONa2S +Pb2+PbS+2Na+PbS+2HCl PbCl2+H2S二、實驗步驟▲：(biuret reaction)