【正文】 具有均一的泡沫狀的結(jié)構(gòu)，厚度約為120 μm，有很強(qiáng)的通透性，對(duì)分子移動(dòng)阻力很小。由于血清中各蛋白組分等電點(diǎn)不同而致表面凈電荷量不等，加之分子大小和形狀各異，因而電泳遷移率不同，彼此得以分離。3．漂洗液：甲醇或乙醇45mL，冰醋酸5mL，水50mL，混勻。難點(diǎn)：電泳技術(shù)的原理。教學(xué)過程中師生活動(dòng)設(shè)計(jì) 測(cè)定蛋白質(zhì)濃度其他方法有哪些？提綱、板書設(shè)計(jì)原理及簡(jiǎn)要操作步驟作業(yè) 簡(jiǎn)述Folin酚試劑法比較其他蛋白質(zhì)測(cè)定方法的優(yōu)點(diǎn)。通常樣品的測(cè)定也可與標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定放在一起，同時(shí)進(jìn)行。這一步混合速度要快，否則會(huì)使顯色程度減弱。在一定的條件下，蘭色深度與蛋白的量成正比。2. 鞏固分光光度計(jì)的使用。激活劑和抑制劑對(duì)酶促反應(yīng)速度影響實(shí)驗(yàn)加樣表管號(hào) 1 2 3 4％淀粉液（mL） 1％NaCl溶液（mL） 2 — — —1％Na2SO4溶液（mL） — 2 — —1％CUSO4溶液（mL） — — 2 —蒸餾水（mL） — — — 2稀釋唾液酶（mL） （2）混勻后，將各管置于37℃水浴8分鐘后，取1號(hào)管中混合液1滴于點(diǎn)滴板上，加1滴KII2溶液顯色，以檢驗(yàn)淀粉的水解程度。 pH對(duì)酶促反應(yīng)速度影響實(shí)驗(yàn)加樣表管號(hào) 1 2 3％淀粉液（mL） 2 2 2PH （mL） 3 — —PH （mL） — 3 —PH （mL） — — 3稀釋唾液酶（mL） 2 2 2（2）混勻后，將各管置于37℃水浴5分鐘后，取2號(hào)管中混合液1滴于點(diǎn)滴板上，加1滴KII2溶液顯色，以檢驗(yàn)淀粉的水解程度。例如Cu2+是唾液淀粉酶的抑制劑。不同的酶最適pH值不盡相同。人體內(nèi)大多數(shù)酶的最適溫度在37℃左右。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、實(shí)驗(yàn)原理★：溫度與酶促反應(yīng)速度關(guān)系密切。教學(xué)重 點(diǎn)與難點(diǎn)重點(diǎn)：唾液淀粉酶催化的酶促反應(yīng)；淀粉水解程度的判斷。3．顯色 除盡溶劑后，向薄層板上噴霧糖顯色劑，于80℃下烘干10min，則各種糖分別顯出不同的顏色。二、實(shí)驗(yàn)步驟▲：1．點(diǎn)樣 選取制備好的薄板一塊， 的直線上均勻選4個(gè)點(diǎn)。吸附力主要與糖的相對(duì)分子質(zhì)量和羥基數(shù)有關(guān)，一般為三糖〉二糖〉單糖，醛糖〉酮糖〉脫氧糖。實(shí)驗(yàn)材料四種糖樣品、染色液、擴(kuò)展劑、層析缸、層析板等實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、實(shí)驗(yàn)原理★：薄層層析(簡(jiǎn)稱TLC)是在吸附層析基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種微量而快速的層析法，它是在吸附劑或支持劑均勻涂布的薄層上進(jìn)行的，故稱薄層層析。教學(xué)過程中師生活動(dòng)設(shè)計(jì) 含苯環(huán)的氨基酸有哪些？雙縮脲反應(yīng)顏色與什么相關(guān)？提綱、板書設(shè)計(jì) 原理及簡(jiǎn)要操作步驟作業(yè) ？？主要參考資料[1]《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，2013[2]《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教程》，王金亭，方俊主編，華中科技大學(xué)出版社，2010總結(jié)分析 實(shí)驗(yàn)過程中讓學(xué)生重點(diǎn)觀察顏色變化的過程； 醋酸鉛反應(yīng)的每一步都要記錄現(xiàn)象《醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》教案 第 5次課 2學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 糖的薄層層析 實(shí)驗(yàn)性質(zhì)基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn) 教學(xué)目的和要求。觀察現(xiàn)象，記錄。教學(xué)重 點(diǎn)與難點(diǎn)重點(diǎn)：蛋白質(zhì)與氨基酸的顯色反應(yīng)原理。觀察沉淀的再溶解。 乙醇引起的變性與沉淀 取3支試管，編號(hào)。放置片刻，傾去上清液，向沉淀中加入少量的水，沉淀是否溶解？為什么？ 某些有機(jī)酸沉淀蛋白質(zhì) 取1支試管，加入蛋白質(zhì)溶液2mL，再加入1mL5%三氯乙酸溶液，振蕩試管，觀察沉淀的生成。此時(shí)析出沉淀為清蛋白。 如球蛋白可在半飽和硫酸銨溶液中析出，而清蛋白則在飽和硫酸銨溶液中才能析出。靜置10分鐘后，再觀察其混濁度。二、實(shí)驗(yàn)步驟：（一）酪蛋白等電點(diǎn)的測(cè)定（1）取同樣規(guī)格的試管4支，按下表順序分別精確地加入各試劑，然后混勻。加熱引起的蛋白質(zhì)沉淀與凝固。（1） 可逆的沉淀反應(yīng) 此時(shí)蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)尚未發(fā)生顯著變化，除去引起沉淀的因素后，蛋白質(zhì)的沉淀仍能溶解于原來溶劑中，并保持其天然性質(zhì)而不變性。難點(diǎn)：蛋白質(zhì)變性與沉淀的關(guān)系，沉淀的蛋白質(zhì)不一定表現(xiàn)為變性；變性的蛋白質(zhì)不一定表現(xiàn)為沉淀。主要參考資料[1] 《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，2013[2]《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》，董曉燕主編，化學(xué)工業(yè)出版社，2010總結(jié)分析讓學(xué)生掌握糖顯色反應(yīng)的原理；給學(xué)生強(qiáng)調(diào)注意觀察各管顏色變化的時(shí)間《醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》教案第 3次課 2學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 蛋白質(zhì)等電點(diǎn)和沉淀反應(yīng)實(shí)驗(yàn)性質(zhì)基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn) 教學(xué)目的和要求。將3支試管同時(shí)置于沸水浴中，觀察、記錄顏色的變化及顏?zhàn)兓臅r(shí)間。間苯二酚反應(yīng)：取3支試管，分別加入1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1% mL。另外取1支試管，只加2滴莫氏試劑作為空白對(duì)照，傾斜4支試管， mL，慢慢立起試管 ，切勿搖動(dòng)。醛糖在同樣條件下呈色反應(yīng)慢。三、結(jié)果與計(jì)算▲：計(jì)算出7號(hào)管光密度值的平均值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上分別查出相應(yīng)的還原糖毫克數(shù)，按下式計(jì)算出樣品中還原糖和總糖的百分含量。表1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線制作管 號(hào)1mg/ml葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液(mL)蒸餾水(mL)DNS(mL)葡萄糖含量(mg)光密度值(OD540nm)1002345607（未知濃度還原糖）0將各管搖勻，在沸水浴中準(zhǔn)確加熱5min取出，冷卻至室溫，用蒸餾水補(bǔ)足至5mL，加塞后顛倒混勻，在分光光度計(jì)上進(jìn)行比色。3. 器材 分光光度計(jì)，天平，水浴鍋，電爐，試管若干等。實(shí)驗(yàn)材料（1）1mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸餾水溶解后，以蒸餾水定容至100mL?！夺t(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》教案第 1 次課 2學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 3，5二硝基水楊酸法（DNS法）測(cè)定還原糖 實(shí)驗(yàn)性質(zhì)設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)教學(xué)目的和要求了解糖的還原性掌握還原糖定量測(cè)定的原理和方法。難點(diǎn)：標(biāo)準(zhǔn)曲線的應(yīng)用。2. 材料 小麥淀粉或玉米淀粉。黃色 桔紅色二、實(shí)驗(yàn)步驟：，按表1分別加入濃度為1mg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液、蒸餾水和DNS試劑，配成不同濃度的葡萄糖反應(yīng)液。計(jì)算7號(hào)管還原糖的百分含量。此反應(yīng)是酮糖的特異反應(yīng)。二、操作步驟▲： α—萘酚反應(yīng)：先取3支試管，分別加入1%葡萄糖溶液、1%淀粉溶液、1%蔗糖溶液，然后向3支試管中各加入2滴莫氏試劑，混勻。觀察、記錄各管顏色。托倫反應(yīng)：取3支試管，分別加入1%阿拉伯糖溶液、1%半乳糖溶液、1% mL，再向各管分別加入托倫試劑1 mL，混勻。教學(xué)重點(diǎn)與難點(diǎn)重點(diǎn)：學(xué)習(xí)測(cè)定蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的方法及沉淀蛋白質(zhì)的方法。蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)可分為兩類。（2） 不可逆沉淀反應(yīng) 此時(shí)蛋白質(zhì)分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)發(fā)生重大改變，蛋白質(zhì)常變性而沉淀，不再溶于原來溶劑中。因此變性蛋白質(zhì)并不一定都表現(xiàn)為沉淀，而沉淀的蛋白質(zhì)也未必都已變性。觀察其混濁度。鹽的濃度不同，析出的蛋白質(zhì)也不同。倒出少量混濁沉淀，加少量水，觀察是否溶解，為什么？將管內(nèi)容物過濾，向?yàn)V液中添加硫酸銨粉末到不再溶解為止。取1支試管，加入蛋白質(zhì)溶液2mL，再加3%硝酸銀溶液1—2滴，振蕩試管，有沉淀產(chǎn)生。觀察沉淀的生成（如果沉淀不明顯，加點(diǎn)NaCl，混勻。觀察各管顏色的變化和沉淀的生成。 Tyr（Trp）+濃硝酸黃色 Phe+少量濃硫酸+濃硝酸黃色 （半胱氨酸和胱氨酸） RSH+2NaOHROH+Na2S+H2ONa2S +Pb2+PbS+2Na+PbS+2HCl PbCl2+H2S二、實(shí)驗(yàn)步驟▲：(biuret reaction)