【正文】 性質(zhì)推測其應(yīng)用提綱、板書設(shè)計 原理及簡要操作步驟作業(yè) ？？主要參考資料[1] 《生物化學(xué)實驗》，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，2013[2]《生物化學(xué)實驗教程》，王金亭，方俊主編，華中科技大學(xué)出版社，2010總結(jié)分析 通過原理分析，幫助學(xué)生理解“沉淀的蛋白質(zhì)不一定表現(xiàn)為變性；變性的蛋白質(zhì)不一定表現(xiàn)為沉淀”； 重點區(qū)別：“可逆沉淀”與“不可逆沉淀”《醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實驗》教案 第 4 次課 2學(xué)時實驗項目 蛋白質(zhì)和氨基酸顯色反應(yīng) 實驗性質(zhì)基礎(chǔ)性實驗 教學(xué)目的和要求。觀察沉淀的再溶解。放置片刻向各管內(nèi)加入水8mL，然后在第2，3號管中各加一滴甲基紅。 乙醇引起的變性與沉淀 取3支試管，編號。有機溶劑沉淀蛋白質(zhì) 取1支試管，加入2mL蛋白質(zhì)溶液，再加入2mL95%乙醇。放置片刻，傾去上清液，向沉淀中加入少量的水，沉淀是否溶解？為什么？ 某些有機酸沉淀蛋白質(zhì) 取1支試管，加入蛋白質(zhì)溶液2mL，再加入1mL5%三氯乙酸溶液，振蕩試管，觀察沉淀的生成。重金屬離子沉淀蛋白質(zhì)：重金屬離子與蛋白質(zhì)結(jié)合成不溶于水的復(fù)合物。此時析出沉淀為清蛋白。加蛋白質(zhì)溶液5mL于試管中，再加等量的飽和硫酸銨溶液，混勻后靜置數(shù)分鐘則析出球蛋白的沉淀。 如球蛋白可在半飽和硫酸銨溶液中析出，而清蛋白則在飽和硫酸銨溶液中才能析出。（二）蛋白質(zhì)的沉淀及變性★▲蛋白質(zhì)的鹽析 無機鹽（硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉等）的濃溶液能析出蛋白質(zhì)。靜置10分鐘后，再觀察其混濁度。此時。二、實驗步驟：（一）酪蛋白等電點的測定（1）取同樣規(guī)格的試管4支，按下表順序分別精確地加入各試劑，然后混勻。蛋白質(zhì)變性后，有時由于維持溶液穩(wěn)定的條件仍然存在（如電荷），并不析出。加熱引起的蛋白質(zhì)沉淀與凝固。提純蛋白質(zhì)時，常利用此類反應(yīng)。（1） 可逆的沉淀反應(yīng) 此時蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)尚未發(fā)生顯著變化，除去引起沉淀的因素后，蛋白質(zhì)的沉淀仍能溶解于原來溶劑中，并保持其天然性質(zhì)而不變性。在蛋白質(zhì)溶液中存在下列平衡：最常用的方法是測其溶解度最低時的溶液pH值。難點：蛋白質(zhì)變性與沉淀的關(guān)系，沉淀的蛋白質(zhì)不一定表現(xiàn)為變性；變性的蛋白質(zhì)不一定表現(xiàn)為沉淀。主要參考資料[1] 《生物化學(xué)實驗》，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，2013[2]《生物化學(xué)實驗》，董曉燕主編，化學(xué)工業(yè)出版社，2010總結(jié)分析讓學(xué)生掌握糖顯色反應(yīng)的原理；給學(xué)生強調(diào)注意觀察各管顏色變化的時間《醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實驗》教案第 3次課 2學(xué)時實驗項目 蛋白質(zhì)等電點和沉淀反應(yīng)實驗性質(zhì)基礎(chǔ)性實驗 教學(xué)目的和要求。提綱、板書設(shè)計原理及操作步驟作業(yè)—萘酚反應(yīng)原理。將3支試管同時置于沸水浴中，觀察、記錄顏色的變化及顏變化的時間。將3支試管同時置于沸水浴中，注意觀察顏色的變化及變化時間。間苯二酚反應(yīng)：取3支試管，分別加入1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1% mL。在兩液分界處有紫紅色環(huán)出現(xiàn)。另外取1支試管，只加2滴莫氏試劑作為空白對照，傾斜4支試管， mL，慢慢立起試管 ，切勿搖動。本反應(yīng)常用來鑒定戊糖，戊糖此反應(yīng)最快，可以和其他糖類區(qū)分。醛糖在同樣條件下呈色反應(yīng)慢。但一些非糖物質(zhì)對此反應(yīng)也呈陽性間苯二酚反應(yīng)：在酸作用下，酮糖脫水生成羥甲基醛，后者可與間苯二酚作用生成紅色物質(zhì)。三、結(jié)果與計算▲：計算出7號管光密度值的平均值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上分別查出相應(yīng)的還原糖毫克數(shù)，按下式計算出樣品中還原糖和總糖的百分含量?！怨饷芏戎禐榭v坐標(biāo)，葡萄糖含量(mg)為橫坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線（電腦Excel完成最好）。表1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線制作管 號1mg/ml葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液(mL)蒸餾水(mL)DNS(mL)葡萄糖含量(mg)光密度值(OD540nm)1002345607（未知濃度還原糖）0將各管搖勻，在沸水浴中準(zhǔn)確加熱5min取出，冷卻至室溫，用蒸餾水補足至5mL，加塞后顛倒混勻，在分光光度計上進行比色。在過量的NaOH堿性溶液中此化合物呈桔紅色，在540nm波長處有最大吸收，在一定的濃度范圍內(nèi)，還原糖的量與光吸收值呈線性關(guān)系，利用比色法可測定樣品中的含糖量。3. 器材 分光光度計，天平，水浴鍋，電爐，試管若干等。（3）未知濃度還原糖。實驗材料（1）1mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸餾水溶解后，以蒸餾水定容至100mL。教學(xué)重點與難點重點:繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法，分光光度計的使用原理和使用方法?！夺t(yī)學(xué)生物化學(xué)實驗》教案第 1 次課 2學(xué)時實驗項目 3，5二硝基水楊酸法（DNS法）測定還原糖 實驗性質(zhì)設(shè)計性實驗教學(xué)目的和要求了解糖的還原性掌握還原糖定量測定的原理和方法。熟悉分光光度計的使用方法。難點：標(biāo)準(zhǔn)曲線的應(yīng)用。（2）3，5二硝基水楊酸試劑： g 3，5二硝基水楊酸并量取262 mL 2mol/L NaOH加到酒石酸鉀納的熱溶液中（182 g酒石酸鉀納溶于500 mL水中），再加5 g結(jié)晶酚和5 g亞硫酸氫鈉溶于其中，攪拌溶解，冷卻后定容到1000 mL貯于棕色瓶中。2. 材料 小麥淀粉或玉米淀粉。實驗內(nèi)容一、實驗原理★：在NaOH和丙三醇存在下，3，5二硝基水楊酸（DNS）與還原糖共熱后被還原生成氨基化合物。黃色 桔紅色二、實驗步驟：，按表1分別加入濃度為1mg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液、蒸餾水和DNS試劑，配成不同濃度的葡萄糖反應(yīng)液。調(diào)波長540nm，用1號管調(diào)零點，分別測出2~6號管的光密度值。計算7號管還原糖的百分含量。 查曲線所得葡萄糖毫克數(shù)提取液總體積/測定時取用體積還原糖(%) =——————————————————————————100% 樣品毫克數(shù)教學(xué)過程中師生活動設(shè)計 糖的還原性，具有還原性的糖結(jié)構(gòu)有何特點？提綱、板書設(shè)計 實驗原理及反應(yīng)方程式，實驗步驟中表1及計算公式作業(yè) 為什么要設(shè)置空白對照？ 標(biāo)準(zhǔn)曲線的定義？主要參考資料[1] 《生物化學(xué)實驗》，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，2013[2]《生物化學(xué)實驗》，董曉燕主編，化學(xué)工業(yè)出版社，2010總結(jié)分析 讓學(xué)生理解糖定量測定的原理及方法； 強調(diào)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制要點； 需要和學(xué)生一起推導(dǎo)還原糖濃度的公式 《醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實驗》教案第 2次課 2學(xué)時實驗項目 糖的呈色反應(yīng)和還原糖檢驗實驗性質(zhì)驗證性實驗教學(xué)目的和要求教學(xué)重 點與難點重點：顏色反應(yīng)鑒別糖的方法難點：鑒別糖的反應(yīng)原理實驗材料儀器：試管及試管架、滴管、移液管及恒溫水浴鍋試劑：莫氏試劑、塞氏試劑、托倫試劑；1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液、1%果糖溶液、1%阿拉伯糖溶液、1%半乳糖溶液實驗內(nèi)容一、實驗原理★：α—萘酚反應(yīng)：糖在濃無機鹽作用下，脫水生成糠醛衍生物，后者在濃硫酸的作用下能與α—萘酚生成紫紅色物質(zhì)，在糖液面與濃硫酸液面間出現(xiàn)紫色環(huán)。此反應(yīng)是酮糖的特異反應(yīng)。托倫反應(yīng)：戊糖在濃酸作用下脫水生成糠醛，后者可與間苯三酚結(jié)合生成櫻桃紅色物質(zhì)。二、操作步驟▲： α—萘酚反應(yīng)：先取3支試管，分別加入1%葡萄糖溶液、1%淀粉溶液、1%蔗糖溶液，然后向3支試管中各加入2滴莫氏試劑，混勻。試管 中液體分成兩層，濃硫酸在試液下面。觀察、記錄各管顏色。 mL，混勻。托倫反應(yīng)：取3支試管，分別加入1%阿拉伯糖溶液、1%半乳糖溶液、1% mL，再向各管分別加入托倫試劑1 mL，混勻。教學(xué)過程中師生活動設(shè)計觀察和記錄各管顏色及顏色變化的時間后，說出各管顏色變化的原因。教學(xué)重點與難點重點：學(xué)習(xí)測定蛋白質(zhì)等電點的方法及沉淀蛋白質(zhì)的方法。實驗材料（一）材料新鮮雞蛋（二）試劑%酪蛋白醋酸鈉溶液200mL蛋白質(zhì)溶液500mL 5%卵清蛋白溶液或雞蛋清的水溶液（新鮮雞蛋清:水=1:9）—醋酸鈉的緩沖溶液100mL3%硝酸銀溶液10mL5%三氯乙酸溶液50mL95%乙醇250mL飽和硫酸銨溶液250mL1硫酸銨結(jié)晶粉末10000mL1111甲基紅溶液20mL（三）器具水浴鍋、溫度計、200mL錐形瓶、100mL容量瓶、吸管、試管及試管架 實驗內(nèi)容★：蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)。蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)可分為兩類。如大多數(shù)蛋白質(zhì)的鹽析作用或在低溫下用乙醇（或丙酮）短時間作用于蛋白質(zhì)。（2）