【正文】 不可逆沉淀反應(yīng) 此時蛋白質(zhì)分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)發(fā)生重大改變，蛋白質(zhì)常變性而沉淀，不再溶于原來溶劑中。蛋白質(zhì)與重金屬離子或某些有機(jī)酸的反應(yīng)都屬于此類。因此變性蛋白質(zhì)并不一定都表現(xiàn)為沉淀，而沉淀的蛋白質(zhì)也未必都已變性。試管號蒸餾水（mL） mol/L蠟酸（mL） mol/L蠟酸(mL) mol/L蠟酸(mL)1—2—3—4 （2）向以上試管中各加酪蛋白的醋酸鈉溶液1mL， 加一管，搖勻一管。觀察其混濁度。最混濁的一管pH即為酪蛋白的等電點(diǎn)。鹽的濃度不同，析出的蛋白質(zhì)也不同。由鹽析獲得的蛋白質(zhì)沉淀，當(dāng)降低其鹽類濃度時，又能再溶解，故蛋白質(zhì)的鹽析作用是可逆過程。倒出少量混濁沉淀，加少量水，觀察是否溶解，為什么？將管內(nèi)容物過濾，向?yàn)V液中添加硫酸銨粉末到不再溶解為止。取出部分清蛋白，加少量蒸餾水，觀察沉淀的再溶解。取1支試管，加入蛋白質(zhì)溶液2mL，再加3%硝酸銀溶液1—2滴，振蕩試管，有沉淀產(chǎn)生。放置片刻傾出清液，向沉淀中加入少量水，觀察沉淀是否溶解。觀察沉淀的生成（如果沉淀不明顯，加點(diǎn)NaCl，混勻。依下表順序加入試劑： 試劑（mL）管號蛋白質(zhì)溶液95%乙醇123111—1———11111—— 振搖混勻后，觀察各管有何變化。觀察各管顏色的變化和沉淀的生成。解釋各管發(fā)生的全部現(xiàn)象。難點(diǎn)：鑒定蛋白質(zhì)與氨基酸的方法。 Tyr（Trp）+濃硝酸黃色 Phe+少量濃硫酸+濃硝酸黃色 （半胱氨酸和胱氨酸） RSH+2NaOHROH+Na2S+H2ONa2S +Pb2+PbS+2Na+PbS+2HCl PbCl2+H2S二、實(shí)驗(yàn)步驟▲：(biuret reaction) 取1支試管，加乳蛋白溶液（蛋清:水=1:9）約1mL和10%NaOH約2mL，搖勻，再加1%CuSO4溶液2滴，隨加隨搖。 向6個試管中按下表加試劑，觀察現(xiàn)象并記錄。然后冷卻至20~30℃，加10滴濃HCL，再將濕潤的醋酸鉛試紙放于管口，加熱，嗅其氣味同時觀察試紙顏色變化。難點(diǎn)：掌握分配系數(shù)，Rf值。為了使所要分析的樣品各組分得到分離，必須選擇合適的吸附劑。糖是多羥基化合物在硅膠G薄層上展層時，被吸附的強(qiáng)弱有差異，同時在展開劑中溶解性質(zhì)也有差異。經(jīng)過適當(dāng)?shù)娜軇┱归_后，糖在薄板上的移動速度是戊糖＞己糖＞雙糖＞三糖。而且薄層層析法操作方便，設(shè)備簡單，所以薄層層析法目前應(yīng)用范圍相當(dāng)廣泛。用毛細(xì)管分別點(diǎn)上不同的糖樣品于4個點(diǎn)，樣品量控制在510μg，斑點(diǎn)直徑不超過3mm。2．展層 將薄板置于盛有層析溶劑的層折缸中，自下向上展層，當(dāng)展層溶劑到達(dá)離薄板頂端約1cm 處時取出薄板，在溶劑前沿處作一記號，于80℃下烘干5min。三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果▲：（1）記下各斑點(diǎn)的位置、顏色，計(jì)算Rf值。教學(xué)過程中師生活動設(shè)計(jì) 還有哪些層板方法？提綱、板書設(shè)計(jì) 原理及簡要操作步驟作業(yè) 何謂Rf值？Rf值與什么因素有關(guān)？主要參考資料[1]《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》，董曉燕主編，化學(xué)工業(yè)出版社，2010[2]《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教程》，王金亭，方俊主編，華中科技大學(xué)出版社，2010總結(jié)分析 點(diǎn)樣是本實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵，教師在指導(dǎo)學(xué)生操作時，強(qiáng)調(diào)點(diǎn)樣要輕、快，穩(wěn)、小并且點(diǎn)樣點(diǎn)要集中； 放展板時，點(diǎn)樣點(diǎn)不要浸如展層溶液中《醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》教案 第 6次課 2學(xué)時實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 酶的特性 實(shí)驗(yàn)性質(zhì)基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn) 教學(xué)目的和要求掌握酶促反應(yīng)速度的幾個主要影響因素了解淀粉水解程度的鑒定。難點(diǎn)：酶活性的影響因素。試劑：%、%淀粉液、%NaCl、%NaCl溶液、1%CuSO4溶液、1%Na2SOpH=、pH=、pH=。溫度降低時，酶促反應(yīng)速度降低以至完全停止；隨著溫度升高，反應(yīng)速度逐漸加快。溫度繼續(xù)升高，反應(yīng)速度反而下降。 pH值也會影響酶促反應(yīng)速度。當(dāng)酶促反應(yīng)速度達(dá)到最大值時的溶液pH值，稱為該酶的最適pH。 凡是能夠提高酶活性，加快酶促反應(yīng)速度的物質(zhì)都稱為酶的激活劑。 凡是能夠降低酶的活性，使酶促反應(yīng)速度減慢，又不使酶變性的物質(zhì)稱為酶的抑制劑。 在不同溫度下，淀粉被唾液淀粉酶水解的程度不同，可由水解混合物遇碘顯現(xiàn)的顏色不同來判斷：淀粉(藍(lán)色)紅色糊精(紅色)無色糊精(不顯色)麥芽糖(不顯色)葡萄糖(不顯色) 二、實(shí)驗(yàn)步驟：：用蒸餾水漱口清除食物殘?jiān)?，再含一口蒸餾水一分鐘后使其流入量筒并稀釋50倍，混勻備用。 溫度對酶促反應(yīng)速度影響實(shí)驗(yàn)加樣表管號 1 2 3 ％淀粉溶液（mL） 稀釋唾液 （ml） 1 1 1煮沸唾液 — — 1搖勻水浴溫度 37℃ 0℃ 37℃（2）水浴8min后，向各管中各滴加1滴KII2溶液，混勻，觀察各管顏色并解釋結(jié)果▲（1）取試管3支，編號，按下表依次加入各種試劑。若不是棕黃色，則繼續(xù)保溫，然后每隔1min繼續(xù)取2號管的混合液1滴于點(diǎn)滴板上，加1滴KII2溶液顯色，直至變成棕黃色時，向所有試管內(nèi)依次滴加2滴KII2溶液顯色。（1）取試管4支，編號，按下表依次加入各種試劑。若不是棕黃色，則繼續(xù)保溫，然后每隔1min繼續(xù)取1號管的混合液1滴于點(diǎn)滴板上，加1滴KII2溶液顯色，直至變成棕黃色時，向所有試管依次滴加1滴KII2溶液顯色。教學(xué)過程中師生活動設(shè)計(jì) 隨著淀粉水解，為什么與碘有顏色反應(yīng)變化？提綱、板書設(shè)計(jì) 原理及簡要操作步驟作業(yè) 1在作離子對酶活的影響時4號管有何作用？？？主要參考資料[1]《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》，董曉燕主編，化學(xué)工業(yè)出版社，2010[2]《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教程》，王金亭，方俊主編，華中科技大學(xué)出版社，2010總結(jié)分析對照實(shí)驗(yàn)要注意同步性；不同人的唾液淀粉酶活性不盡相同，讓學(xué)生注意到樣本差異；重點(diǎn)分析激活劑和抑制劑對酶促反應(yīng)速度的影響《醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》教案 第 7次課 2學(xué)時實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 Folin酚試劑法測蛋白質(zhì)濃度 實(shí)驗(yàn)性質(zhì)綜合性實(shí)驗(yàn) 教學(xué)目的和要求1. 學(xué)習(xí)會用Folin酚試劑法測蛋白質(zhì)濃度的方法。教學(xué)重點(diǎn)與難點(diǎn) 重點(diǎn)：分光光度計(jì)的使用 難點(diǎn)：標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制實(shí)驗(yàn)材料試劑：標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液，F(xiàn)olin酚試劑，樣品液蛋白質(zhì)器材：分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、試管、移液管實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、實(shí)驗(yàn)原理★Folin酚試劑法測蛋白質(zhì)濃度的顯色原理與雙縮脲方法是相同的，只是加入了第二種試劑，即Folin酚試劑，以增加顯色量，從而提高了檢測蛋白質(zhì)的靈敏度。Folin酚試劑中的磷鉬酸鹽磷鎢酸鹽被蛋白質(zhì)中的酪氨酸和苯丙氨酸殘基還原，產(chǎn)生深蘭色（鉬蘭和鎢蘭的混合物）。二、實(shí)驗(yàn)步驟▲：取16支大試管，1支作空白，3支留作未知樣品，其余試管分成兩組，分別加入0，（濃度為250mg/ml）。（Folin酚試劑），同樣立即混勻。然后在室溫下放置30分鐘，以未加蛋白質(zhì)溶液的第一支試管作為空白對照，于700nm處測定各管中溶液的吸光度值。：取1毫升樣品溶液（其中約含蛋白質(zhì)20~250微克），按上述方法進(jìn)行操作，取1毫升蒸餾水代替樣品作為空白對照。即在標(biāo)準(zhǔn)曲線測定的各試管后面，再增加3個試管。根據(jù)所測樣品的吸光度值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的蛋白質(zhì)量，從而計(jì)算出樣品溶液的蛋白質(zhì)濃度▲。主要參考資料[1] 《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，2013[2]《生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》，董曉燕主編，化學(xué)工業(yè)出版社，2010總結(jié)分析 強(qiáng)調(diào)Folin酚試劑法測蛋白質(zhì)濃度的顯色原理； 鞏固分光光度計(jì)的使用《醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》教案 第 8 次課 2學(xué)時實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 血清蛋白的醋酸纖維薄膜電泳 實(shí)驗(yàn)性質(zhì)基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn) 教學(xué)目的和要求。教學(xué)重 點(diǎn)與難點(diǎn)重點(diǎn)：掌握醋酸纖維薄膜電泳的操作方法。實(shí)驗(yàn)材料器材：DYYⅢ6型常壓電泳儀、醋酸纖維薄膜（2 cm8cm）、.培養(yǎng)皿、蓋玻片、濾紙、鑷子。2． 染色液：氨基黑10B ，用甲醇50mL、冰醋酸10mL、水40mL溶解（可重復(fù)使用）。4．透明液（僅在定量分析時使用）：無水乙醇7份，冰醋酸3份，混勻。醋酸纖維薄膜電泳(CAME)是一種區(qū)帶