【正文】 對的檢測技術(shù)，因而不能未卜先知。為此，急需建立適應(yīng)新?lián)郊偾闆r的快速、準(zhǔn)確的檢測方法。本實(shí)驗(yàn)對奶粉蛋白質(zhì)進(jìn)行檢驗(yàn)，對奶粉中主要蛋白質(zhì)定性定量檢測，為奶粉的摻假檢驗(yàn)提供可靠數(shù)據(jù)，以確保原料乳的質(zhì)量和安全。本課題目的將系統(tǒng)的定性定量分析奶制品中的主要蛋白質(zhì)，及各種蛋白質(zhì)的比例和百分含量。本實(shí)驗(yàn)將去除繁瑣的摻假物的檢測，而是直接檢測奶品的蛋白質(zhì)，為奶制品檢測提供新的途徑。二、研究的基本內(nèi)容，擬解決的主要問題本研究的目的是從幾種傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)測定方法中來尋找適合乳品蛋白質(zhì)測定的方法。主要選用考馬斯亮藍(lán)法(Bradford法) [3,9]，雙縮脲法[5]，與凱氏定氮法的結(jié)果進(jìn)行比較。從中找出最適合乳源蛋白質(zhì)測定的方法。本課題還研究反相高效液相色譜法[7]對牛乳蛋白和常見的三種可能摻假蛋白質(zhì)進(jìn)行定性分析，以期建立有效可行的分析檢測乳蛋白成分和牛乳中蛋白質(zhì)摻假的方法。三、研究步驟、方法及措施1. 通過凱氏定氮法(國標(biāo)法)來準(zhǔn)確測定牛乳中蛋白質(zhì)的含量。2. 考察這三種方法檢測牛乳蛋白質(zhì)的準(zhǔn)確性與重復(fù)性，并與國標(biāo)法結(jié)果進(jìn)行比較。3. 考察Bradford方法、雙縮脲法對于牛乳中摻入不同比例的尿素溶液、三聚氰胺溶液樣品，樣品經(jīng)前處理后，看能否準(zhǔn)確測定牛乳蛋白含量。4. 應(yīng)用反相高效液相色譜法對牛乳蛋白和常見的兩種可能摻假蛋白質(zhì)進(jìn)行定性分析，以期建立有效可行的分析檢測乳蛋白成分和牛乳中蛋白質(zhì)摻假的方法。 四、研究工作進(jìn)度 第1 ～4周 查閱相關(guān)文獻(xiàn)，對測定奶制品中氮含量的方法進(jìn)行認(rèn)識(shí)了解。提交文獻(xiàn)綜述，開題報(bào)告。 第 5～10周 實(shí)驗(yàn)階段，用凱氏定氮法來準(zhǔn)確測定牛乳中蛋白質(zhì)的含量；然后分別用Bradford方法、雙縮脲法測定牛奶及在牛奶中摻入不同比例的尿素溶液、三聚氰胺溶液樣品的蛋白質(zhì)含量；應(yīng)用反相高效液相色譜法對牛乳蛋白和常見的三種可能摻假蛋白質(zhì)進(jìn)行定性分析。 第11～13周 對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理計(jì)算。 第14～16周 分析比較幾種方法，并提出自己的看法。 第17～20周 撰寫畢業(yè)論文，提交論文。五、主要參考文獻(xiàn)[1] 吳茹怡．牛奶摻假物檢驗(yàn)方法研究[J]．大眾科技．2005，83(9)：9192[2] Liying wang．Study on protein quality evaluation of raw milk and milk products[D]．Northwest A amp。 F University．2010[3] 張愛梅，王榮，尉華，謝希暉，施有琴，賈正平，孫坤．蛋白質(zhì)檢測的方法學(xué)研究概述[J]．生物技術(shù)通汛．201l，22(1)：130134[4] 許家喜．蛋白質(zhì)的檢測方法與乳制品中蛋白含量測定[J]．大學(xué)化學(xué)．2009，24(1)：6669[5] 梁芳慧，董麗丹，安衛(wèi)東，謝志國，鐘太剛．乳及乳制品中蛋白質(zhì)檢測技術(shù)的研究進(jìn)展[J]．現(xiàn)代科學(xué)儀器．2010(6)：154156[6] 郭穎娜，孫衛(wèi)．蛋白質(zhì)含量測定方法的比較[J]．河北化工．2008，33(4)：3637[7] 王雅．蛋白質(zhì)測定實(shí)驗(yàn)的研究[J]．實(shí)驗(yàn)室研究與探索．2005，24(4)：5859[8]馬元元，劉丹，吳娟．徐飛奶制品安全問題現(xiàn)狀及常見檢測技術(shù)[J]．獸醫(yī)導(dǎo)刊．2010(7)：4956[9] Bradford M．M． Determination of trace amont of proteins by (CBB)G250[J]．Anal Biochem．1996，204(2)：254256[10] Lixin Liu．Research on detection technique of milk protein[D]．Shaanxi University of Science amp。 Technology．2011六、指導(dǎo)教師意見 指導(dǎo)教師簽字： 年 月 日七、系級教學(xué)單位審核意見：審查結(jié)果： □ 通過 □ 完善后通過 □ 未通過 負(fù)責(zé)人簽字：年 月 日附錄2 文獻(xiàn)綜述附錄2 文獻(xiàn)綜述一、 課題國內(nèi)外發(fā)展現(xiàn)狀蛋白質(zhì)是乳及乳制品中的主要成分，它對乳制品的理化特性有著重要的影響。乳蛋白含有大量的人體必需氨基酸，是人體細(xì)胞不可缺少的，是牛乳中最重要的特征營養(yǎng)成分，乳及乳制品中蛋白質(zhì)含量是必測指標(biāo)[1]。因此，近年來，人們發(fā)展了許多測定蛋白質(zhì)的方法?，F(xiàn)在國際上通用1883年發(fā)明的凱氏定氮法[2]測定蛋白質(zhì)中的含氮量,以此來推算出蛋白質(zhì)的含量[3]。在經(jīng)典的凱氏定氮法的基礎(chǔ)上，為了能更為準(zhǔn)確的測定出氮的含量，人們對凱氏定氮法的基本環(huán)節(jié)進(jìn)行了改進(jìn)[46]。分光光度法[9]以分子吸收光譜為基礎(chǔ)的蛋白質(zhì)含量測定方法，雙縮脲法[79]是傳統(tǒng)的分光光度法測定蛋白質(zhì)的方法，另外測定蛋白質(zhì)含量測定的方法還有Folin—酚試劑法(Lowry法) [10]、紫外吸收法[11]，還有一種在近幾十年才普遍使用起來的較新的測定法——考馬斯亮藍(lán)法(Bradford法) [12] [15]。二、研究主要成果目前科學(xué)界經(jīng)常使用的關(guān)于乳及乳制品蛋白質(zhì)檢測的方法主要以傳統(tǒng)方法為主，國內(nèi)常用的經(jīng)典方法主要分為4種：凱氏定氮法、雙縮脲法(又被稱為Biuret方法)、Folin一酚試劑法(又稱為Lowry法)以及紫外吸收法，同時(shí)考馬斯亮藍(lán)法在最近十幾年的檢測方法中也經(jīng)常被使用。近年來，國外又發(fā)現(xiàn)了快速檢測蛋白質(zhì)的方法[13]，紅外光譜分析法[14]、Udy染料染色法[16]，毛細(xì)管電泳法[17]等測定方法，這些方法在奶制品中氮含量的測定技術(shù)發(fā)展領(lǐng)域都很有前景。三、發(fā)展趨勢隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，消費(fèi)者對食品的需求從數(shù)量滿足型向質(zhì)量需求型和膳食營養(yǎng)型過渡，乳類食品作為一 種“最接近完善的食品”在改善膳食結(jié)構(gòu)、補(bǔ)充營養(yǎng)、增強(qiáng)體質(zhì)方面發(fā)揮著重要作用其質(zhì)量安全問題日益受到大眾關(guān)注，因此，對奶及奶制品中氮含量測定技術(shù)的發(fā)展，找到一種簡便易行的蛋白質(zhì)質(zhì)量評價(jià)的方法，可以建立起模型以便捷快速判定原料乳及乳制品中的蛋白質(zhì)是否存在摻假的可能，如未發(fā)現(xiàn)異常就可以直接進(jìn)入生產(chǎn)系統(tǒng)及流通領(lǐng)域，大大節(jié)約了檢測時(shí)間及檢測成本，并且可以有效地規(guī)避很多潛在的蛋白質(zhì)摻假風(fēng)險(xiǎn)；同時(shí)也為奶源系統(tǒng)對于奶源蛋白質(zhì)質(zhì)量提供了指導(dǎo)信息，大大提高了工作效率、降低了工作的難度。因此建立快速簡便的測定奶粉中蛋白質(zhì)的分析方法具有現(xiàn)實(shí)意義。四、存在問題目前，乳粉蛋白質(zhì)的測定都采用國家標(biāo)準(zhǔn)GBT/《食品中蛋白質(zhì)的測定方法》，以凱氏定氮法為基礎(chǔ)：該方法步驟耗時(shí)長，操作繁瑣，但測定牛乳中總氮含量準(zhǔn)確度高，重復(fù)性好。蛋白摻假是牛乳摻假的常見方式，一般摻入無機(jī)氮類如尿素等或摻入水解動(dòng)物蛋白等。然而，目前還沒有一種有效的能快速準(zhǔn)確測定乳源蛋白質(zhì)和摻假的方法，因此，對于乳源蛋白質(zhì)快速檢測方法的研究對于保證乳品質(zhì)量和打擊摻假具有十分重要的意義。五、主要參考文獻(xiàn)[1] 程濤，孫艷波，李?。p縮脲法測定乳中酪蛋白含量[J] ．中國乳品工業(yè)．2008，28(3)：3335[2] 張愛梅，王榮，尉華，謝希暉，施有琴，賈正平，孫坤．蛋白質(zhì)檢測的方法學(xué)研究概述[J]．生物技術(shù)通汛．201l，22(1)：130134[3] 大連輕工業(yè)學(xué)院，華南理工大學(xué)．食品分析[M]．北京：中國輕工業(yè)出版社．1994：214216[4] 張慧玲．凱氏定氮法測定蛋白質(zhì)含量的改進(jìn)[J]．科技資訊．2009，25(1)[5] 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），在所有的樣品中的總蛋白測定的最佳結(jié)果，所有的結(jié)果沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0時(shí)05分）。Bradford法（不含脂類提?。╋@示，測定所有樣品的總蛋白，其結(jié)果均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0時(shí)05分），總氮用凱氏定氮法獲得最好的結(jié)果。然而，當(dāng)把酪乳粉，乳清蛋白粉樣品的這些結(jié)與TPN進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，他們在統(tǒng)計(jì)上是互不相同的（PO0：05）。這意味著，Bradford法的高靈敏度足以克服由于樣品中的脂肪材料的濁度的問題。用Bradford方法測定的全脂奶粉，乳清蛋白粉樣品和沒有提取脂質(zhì)的樣品的總蛋白之間不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（PO0：05）。關(guān)鍵詞：蛋白質(zhì)分析；凱氏定氮法；Bradford法；分光光度法牛奶是幾種物質(zhì)（乳糖，脂肪，蛋白質(zhì)，氨基酸，尿素，肌酐等）的混合物，其組成取決于幾個(gè)因素，如遺傳育種程序，喂養(yǎng)計(jì)劃和氣候條件，等等。在過去的幾年里，奶酪消費(fèi)量增加，因此牛奶的蛋白質(zhì)含量是影響該行業(yè)支付的價(jià)格一個(gè)重要的因素。使用分光光度法測定總蛋白質(zhì)的含量常用在這幾個(gè)領(lǐng)域，如臨床分析，生物化學(xué)，生理學(xué)，醫(yī)療的研究以及許多其他的領(lǐng)域。用凱氏定氮法（Helrich，附錄3 中文譯文1990），雖然也有兩個(gè)主要的問題，即，需要長的一段時(shí)間來進(jìn)行整個(gè)測定過程，并且需要分別進(jìn)行兩次分析以確定非蛋白氮（NPN）和總蛋白氮（TPN）之間的差異，但是它依然被廣泛應(yīng)用于食品科學(xué)與技術(shù)，是官方認(rèn)可的標(biāo)準(zhǔn)的參考方法。正如薩雅，薩雅，Lichtig（1998）指出的，關(guān)于分光光度法測定蛋白質(zhì)的干擾物質(zhì)的研究有許多，然而，分光光度法或分光光度法與其他的方法如凱氏定氮法之間的比較研究并不多。在本文中，將比較研究凱氏定氮法和分光光度法（紫外吸收法測樣品在280和220nm的吸光度（Stoscheck，1990），雙縮脲法測樣品在340和550nm的吸光度（Bardawill Gornall，大衛(wèi)，1949年），Bradford法（布拉德福德之間的比較研究，1976年），Lowry法（洛瑞，Rosebrough，法爾和蘭德爾，1951年），四氯苯醌法（薩雅，VERRI，薩雅，1999））分別對牛奶粉樣本的總蛋白（脫脂奶粉，全脂牛奶乳粉，乳清蛋白粉，酪乳粉）進(jìn)行判定。選擇這些方法是因?yàn)樗鼈兒苋菀走M(jìn)行，它們都是基于不同的反應(yīng)。在紫外吸收法（Stoscheck，1990）和雙縮脲法（Gornall等人，1949）中，吸光度分別是由于肽鍵的電子躍遷和復(fù)雜的銅/肽鍵的電子躍遷造成的，因此在這兩種方法都是對肽腱進(jìn)行了測量。紫外吸收法280 nm的方法（Stoscheck，1990）的吸光度是由于少數(shù)氨基酸的電子躍遷引起的。在氯苯醌法中（伯克斯＆Slifikin的，1963年。：薩雅等，1999）的吸光度是由于復(fù)合氨基酸/醌的電荷轉(zhuǎn)移引起的。因此，在這兩種方法（紫外光280 nm和四氯苯醌）中都是對氨基酸進(jìn)行了測量。Lowry法（Lowry等，1951周＆戈?duì)柎奶梗?960。萊格勒，穆勒廣場，Meniges Hetikamp Pflieger酒店，Julich的，1985年）中的樣品的吸光度取決于一些氨基酸的濃度，同時(shí)也取決于叔肽的量，因?yàn)閮烧叨紩?huì)使福林酚試劑的量減少。Bradford法是基于考馬斯亮藍(lán)250