土壤中產淀粉酶芽孢桿菌的篩選與鑒定和淀粉酶活測定-資料下載頁
2025-05-16 02:53本頁面
【正文】 ，培養(yǎng)基配制后基本為紫色，但是部分培養(yǎng)基在高壓蒸汽滅菌后變?yōu)榫萍t色，查詢資料后知道該實驗使用的酸堿指示劑溴甲酚紫是作為酸堿指示劑加入在，（黃）（紫），通過詢問老師得知使用高壓蒸汽滅菌在升溫和降溫的過程較長，在這個過程中，可能某些物質發(fā)生變化，使得溶液的酸堿度發(fā)生變化；思考：是否可以用pH試紙直接檢測培養(yǎng)后的培養(yǎng)基的酸堿度；或者培養(yǎng)后再加入酸堿指示劑；可能結果較不為直觀，但應該可達到相同的目的，即產酸產氣的檢測 VP實驗中，在加入ɑ酚萘后上層溶液變?yōu)椴煌该鞯娜榘咨睾鬅o任何明顯變化，詢問老師后得知，可能為加入藥品錯誤，堿性不足，發(fā)生了其他的反應；之后發(fā)現(xiàn)其他組別也出現(xiàn)類似的情況，基本確定為加入的堿性物質濃度不足，沒有形成強堿環(huán)境，具體變化不明；重復試驗，其中編號1B出現(xiàn)一個陽性一個陰性結果，由于接種時種子培養(yǎng)基內存在較多冷凝水，可能沒取到菌種或者數(shù)量較少，不排除受污染的情況；由于時間關系未再進行重復，該實驗也提醒我們在實驗過程中應該保持小心、仔細，藥品的選用和用量都可能對結果造成干擾，并且也再次提醒我們重復實驗和平行對照的重要性、酪氨酸水解和卵磷脂酶實驗中，由于酪素、酪氨酸和卵黃中含有蛋白質等物質在高溫條件下變性，因此不能直接高溫（121℃）蒸汽滅菌，應當根據(jù)材料的不用采取不同的方法，例如酪素和酪氨酸在110℃滅菌，蛋黃在無菌條件下取用即可 ，兩種菌對偏酸性的抗逆性較低；溶菌酶試驗表明編號2C的菌株對溶菌酶具有一定的抗逆性；，通過渾濁度可以直觀地對比出菌株生長或者不生長，但是對于菌株的生長情況比較難以把握，在溶菌酶試驗中可以使用固體培養(yǎng)基，用小濾紙片浸沒在溶菌酶中，通過透明圈的大小來判斷抑制情況，編號1B的菌種能對檸檬酸鹽進行利用，但該實驗一直到第五天才出現(xiàn)輕微現(xiàn)象，第六天才出現(xiàn)明顯現(xiàn)象，說明芽孢桿菌對檸檬酸鹽的利用能力較低，需要長時間培養(yǎng)觀察才能做出判定，僅是初步鑒定，缺乏比較嚴格的重復和對照，部分項目可能存在誤差，部分項目由于條件限制沒有實施，實際操作中對微生物的種的鑒定還應該進行基因檢測和鑒定才能最終判斷 我們選取淀粉檢驗時透明圈較大的2C作為酶活檢測對象，實際結果酶活力較并不高；通過課堂知識和老師講解，我們知道種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基的配方不同是由于微生物的最適生長條件和最適產物條件的不同，對于我們選用的菌株，要得出最適的發(fā)酵配方是需要建立大量的實驗基礎上的，我們通過查詢資料得帶的配方只能作為參考使用，實際上可能并非該菌株的最優(yōu)配方；因此測得的酶活力相應的只能作為一個參考量，并非該菌株的酶活的最優(yōu)結果6．綜合討論通過本次實驗，我們對于一個實驗，從開始查閱資料、設計實驗到實驗操作、記錄和總結有一個比較清晰的了解，同時也確實體會到了做實驗的辛苦。對于實驗設計上，我們還存在一些不足，例如對于查閱資料的整理和使用，以及項目的選擇，都存在一些不清晰和不合理，有的時候知其然而不知其所以然，所以導致我們小組在實驗過程中會出現(xiàn)分歧和爭端，出現(xiàn)這樣的分歧說明我們對實驗的認識和了解還不足夠深入和透徹；對于實驗的步驟安排不太恰當和操作失誤導致重新進行某個項目的實驗都無形中增加了時間和負擔，對于實驗的統(tǒng)籌安排應該在實驗開始前就做好的工作，而操作的不熟練和小心嚴謹、實驗記錄的準確和嚴密則有賴于我們自身素質提升。這個實驗是小組通力合作，小組成員的分工配合、團結協(xié)作是我們完成這個實驗的關鍵之一；良好的配合使得我們在配制培養(yǎng)基和實驗操作上快人一步，而對于某個項目的不清楚的地方的討論也有助于加深小組成員對實驗的理解，小組有分歧，有爭論，最終通過討論或者查閱資料詢問老師而得出結果，既有利于實驗的進行，也加強了成員間的溝通和交流。同其他組進行交流和結果參照也是學習的方式之一。對芽孢桿菌的形態(tài)學和生理生化鑒定基本情況良好。形態(tài)學由于此前有做過類似的操作，因此本次實驗進行的情況比較有效率，較大的問題主要存在于小組成員對觀察現(xiàn)象的描述和芽孢染色的操作和觀察問題上；在形態(tài)學鑒定的時候，出現(xiàn)兩株菌株的菌落看起來一樣但是產淀粉酶情況相反的情況，菌株的個體形態(tài)和群體形態(tài)只是鑒定的一個方面，要對菌株進行準確的鑒定應該進行更詳細的生理生化鑒定和基因檢測。而生理生化鑒定由于條件限制我們只能進行部分項目，總體情況良好，對于某些項目，例如卵黃實驗、溶菌酶試驗、酪素、酪氨酸、還存在一些不同，在老師講解過來，還需要經過討論、理解后才開始實施，實驗操作也存在一些差錯導致項目重來的情況，造成時間和材料的浪費，說明實驗預習和設計的時候在這方面做還存在不足，對項目的了解和認識還不夠深入。因此，對于實驗的學習和熟悉仍然是我們的一個需要重點把握的方面，而是作為一個學習生物學的學生應當掌握的技能。通過鑒定可以得知，兩種菌株的耐鹽情況較好，但是對極度溫度的抗逆性不是很明顯，而由于試驗條件、沒有選擇合適的溫度梯度也是一個重要因素；而由于芽孢桿菌在不良環(huán)境下具有一定的抗逆性的這種良好的性狀使得其在生產應用中有廣泛的應用。而我們本次實驗中著重檢測其產淀粉酶的情況，檢測結果酶活偏低，但不能因此說明此菌的淀粉酶缺乏應用價值，對于某種菌的最適生長培養(yǎng)條件和最適培養(yǎng)條件都是需要我們通過大量的實驗來得到，我們在這個實驗中采用的發(fā)酵培養(yǎng)基配方只是作為一個參考，而需要判斷該菌所產淀粉酶是否可以具有生產應用價值，還需要進一步的實驗來說明。[1]周德慶，徐德強．微生物學實驗教程（第3版）．高等教育出版社．2013[2]孫建義，許梓榮．芽孢桿菌的分離鑒定及應用研究．浙江農業(yè)學報11（1） 47~50，1999[3]，等．伯杰式細菌學鑒定手冊（第八版）．科學出版社．1984：729~759．[4]鄒偉，趙玉軍等．土壤中芽孢桿菌的分離及初步鑒定．[J]，02期[5]傅冰，王東明．土壤中產淀粉酶菌株的分離、鑒定及提高產酶能力的研究．[J]綠色科技，2012，03．3[6] 楊慧， 2007,
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