20xx年唾液淀粉酶活性的觀察實(shí)驗(yàn)報(bào)告范文-資料下載頁(yè)
2025-01-26 00:43本頁(yè)面
【正文】 。③向測(cè)定管中加入NaOH時(shí)應(yīng)迅速，否則酶與底物繼續(xù)反應(yīng)使結(jié)果偏大。
淀粉酶活性測(cè)定時(shí)70℃水浴為何要嚴(yán)格保溫15分鐘？保溫后為何要立即于冰浴中驟冷？
答：由于淀粉酶不耐熱，在70℃下處理一定時(shí)間可以鈍化，嚴(yán)格保溫15分鐘可以達(dá)到理想的鈍化效果，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，淀粉酶活性也會(huì)受到影響；時(shí)間不足，淀粉酶鈍化不完全。保溫后立即驟冷是為了通過(guò)劇烈的溫變改變淀粉酶的結(jié)構(gòu)以防止在隨后的反應(yīng)中復(fù)性，這樣就保證了在隨后的40℃溫浴的酶促反應(yīng)中淀粉酶不會(huì)再參與催化反應(yīng)。此外我認(rèn)為冰浴使酶迅速降溫，便于嚴(yán)格控制高溫處理時(shí)間的長(zhǎng)短。
？各管于40℃水浴準(zhǔn)確保溫15分鐘的作用？
答：酶實(shí)驗(yàn)體系的pH值變化或變化過(guò)大，會(huì)使酶活性下降甚至完全失活。，同時(shí)穩(wěn)定溶液的pH不至于在反應(yīng)過(guò)程中大幅波動(dòng)。 40℃水浴準(zhǔn)確保溫15分鐘為調(diào)整酶促反應(yīng)的最適溫度
眾多測(cè)定淀粉酶活力的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中一般均采取鈍化淀粉酶的活力而測(cè)淀粉酶和測(cè)總酶活力的策略，為何不采取鈍化淀粉酶活力去測(cè)淀粉酶活力呢？這種設(shè)計(jì)思路說(shuō)明什么？
答：β淀粉酶與α淀粉酶的催化特性是有差異的。β淀粉酶主要作用于直鏈淀粉的α1，4糖苷鍵，而且僅從淀粉分子外圍的非還原性末端開(kāi)始，切斷至α1,6鍵的前面反應(yīng)就停止了；而α淀粉酶則無(wú)差別地作用于直鏈淀粉與支鏈淀粉的α1，4糖苷鍵，所以β淀粉酶需要α淀粉酶淀粉支鏈的α1，4糖苷鍵后才能完全體現(xiàn)其催化能力。 此外我認(rèn)為在實(shí)驗(yàn)中溫度比酸度更易控制，鈍化α淀粉酶難度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于β淀粉酶，而且若提高酸度鈍化α淀粉酶，則回調(diào)最適pH時(shí)α淀粉酶也有可能由于復(fù)性恢復(fù)活力。
這種設(shè)計(jì)思路說(shuō)明在測(cè)定酶的比活力時(shí)要綜合考慮各種可能出現(xiàn)的酶的性質(zhì)以及它們之間的聯(lián)系，也要考慮到實(shí)驗(yàn)操作的可行性。
本實(shí)驗(yàn)中所設(shè)置的對(duì)照管的作用？它與比色法測(cè)定物質(zhì)含量實(shí)驗(yàn)中設(shè)置的空白管有何異同？本實(shí)驗(yàn)可否用對(duì)照管調(diào)分光光度計(jì)的100%T？為什么？
答：消除非酶促反應(yīng)（如淀粉酸性環(huán)境下加熱水解）和非測(cè)定時(shí)間內(nèi)的酶促反應(yīng)引起的麥芽糖的生成帶來(lái)的誤差。
兩種都是為了消除非測(cè)定部分對(duì)光的吸收，空白組是為了消除溶液中溶劑等其它組分對(duì)光的吸收，而對(duì)照管是為了消除非測(cè)量所需反應(yīng)所得的多余溶質(zhì)對(duì)光的吸收。
不可，因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)曲線的確定是在空白的基礎(chǔ)上的，得到的是OD值與麥芽糖含量的關(guān)系
我們所測(cè)定得到的總酶活力減去所測(cè)定得到的淀粉酶活力是否就等于淀粉酶活力？為什么？你的結(jié)論說(shuō)明什么？ 答：不等于。因?yàn)棣碌矸勖负挺恋矸勖缸饔糜讦?,4糖苷鍵，但二者都不能水解支鏈的α1，6糖苷鍵，而我們所測(cè)定得到的總酶活力是二者在與R酶的共同作用下測(cè)得的酶活力，R酶能夠降解支鏈淀粉，斷裂α1,6糖苷鍵，從而增大了β淀粉酶和α淀粉酶可水解的底物濃度，使測(cè)得的總活力大于β淀粉酶和α淀粉酶單獨(dú)作用的酶活力之和。 我的結(jié)論說(shuō)明實(shí)驗(yàn)時(shí)要考慮各種酶協(xié)同作用的綜合因素
八、參考文獻(xiàn)
[1]生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)自編教材 [2]基礎(chǔ)生物化學(xué) 趙武玲 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社
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