從土壤中分離產淀粉酶的芽孢桿菌實驗方案說明-資料下載頁
2025-04-22 22:41本頁面
【正文】 不呈紅色，（用“－”表示）。 吲哚試驗 試管標記 取裝有蛋白胨水培養(yǎng)液的試管，編號。接種培養(yǎng) 以無菌操作分別接種少量菌苔到以上相應試管中，空白對照管不接種，置37℃恒溫箱中培養(yǎng)24h。 觀察記錄 在培養(yǎng)液中加入乙醚1～2ml，經充分振蕩使吲哚萃取至乙醚中，靜置片刻后乙醚層浮于培養(yǎng)液的上面，此時沿管壁緩慢加入5～10滴吲哚試劑（加入吲哚試劑后切勿搖動試管，以防破壞乙醚層影響結果觀察），如有吲哚存在，乙醚層呈現(xiàn)玫瑰紅色，此為吲哚試驗陽性反應，否則為陰性反應，陽性用“＋”、陰性用“－”表示。 耐鹽性試驗將分離獲得的細菌分別接種在NaCl濃度為2%，10%，20%，25%，的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中,置37℃下培養(yǎng),觀察生長情況 [7]。檸檬酸鹽試驗取裝有西蒙斯氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基的試管分別標記待測菌種的編號和空白對照以無菌操作分別將少量菌苔接種于各支相應的管中，然后置于37℃恒溫箱中培養(yǎng)24h。觀察結果，若培養(yǎng)基變藍色，則表明該菌能利用檸檬酸鹽作為碳源而生長，即為陽性反應，以“＋”表示。若培養(yǎng)基仍為綠色則為陰性反應，以“－”表示【8】。產淀粉酶芽孢桿菌產淀粉酶活性的測定發(fā)酵：將初篩純菌種接種于30/250mL 種子培養(yǎng)基,37 ℃、250r/min搖床培養(yǎng)過夜。種子液以2 %接種量接種于產酶液體培養(yǎng)基50/500mL ,相同條件培養(yǎng)72h ,發(fā)酵8000r/min，離心10min ,取上清液測酶活, 每個樣品重復3 次,最后結果取平均值。在Young等方法的基礎上作了改進：取5ml %的可溶性淀粉溶液，在40℃水浴中預熱10min，反應5min后，用5ml 。，在620nm處測光密度。，以不加酶液（加同樣體積的緩沖液）的管為對照。酶活力根據(jù)下式計算：酶活力（u/ml）=(Rr)/R*50*D式中R、r分別表示對照和反應液的光密度，D為酶的稀釋倍數(shù)。調整D使（Rr）/。確定在40℃ 5min內水解1mg淀粉的酶量為一個活力單位。菌種保藏法（斜面冰箱包保藏法） 將菌種接種在新鮮外面培養(yǎng)基上，定溫培養(yǎng)長出豐滿菌苔后（一般形成芽孢的細菌要形成芽孢），貼上標簽，放在試管上，在棉塞部位用尼龍紙或防水紙包好，以防外界污染和水浸濕，放入4℃冰箱中保藏。六、可能遇到的問題和需要注意的關鍵點。要嚴格按照培養(yǎng)基配方配制培養(yǎng)基，防止雜菌污染。觀察結果時要注意滴加藥量及反應時間。嚴格無菌操作，防止污染情況的發(fā)生。稱藥品用的藥匙不要混用，稱完藥品應及時蓋緊瓶蓋。調pH時要小心操作，避免回調。不同培養(yǎng)基各有配制特點，要注意具體操作。革蘭氏染色時注意脫色的時間的控制，過長或過短都會影響實驗結果。進行染色鑒定時，都應有已知的對照菌種在同等條件下染色，然后進行對比記錄結果。在芽孢染色中，應注意溫度的控制，避免染料在玻片上蒸騰，否則影響實驗結果。 完美DOC格式整理
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