【導讀】低聚糖和葡萄糖等，是工業(yè)生產(chǎn)中應用最為廣泛的酶制劑之一。目前，α-淀粉酶。紡織等許多行業(yè)。本次設計的淀粉酶發(fā)酵，分別以玉米粉為碳源，以豆餅為氮源，α-淀粉酶的生產(chǎn)工藝。

　　

【正文】 子交換層析、疏水作用層析、親和層析和電泳等，是蛋白質分 離純化 第 9 頁 的主要方法。通過超濾、濃縮、脫鹽和聚丙烯酰胺垂直板凝膠電泳，對利用基因工程菌生產(chǎn)的重組超耐熱耐酸性 α一 淀粉酶進行純化，得到電泳純級的超耐熱耐酸 α一 淀粉酶，純化倍數(shù)為 ，活力回收率為 %。 但上述方法存在的共同問題是，連續(xù)操作和規(guī)模放大都比較困難。 反膠團萃取具有選擇性高、正萃與反萃可同時進行、分離與濃縮同步進行、操作簡單和易于放大等優(yōu)點，并能有效防止生物分子變性失活。以 CTAB /正丁醇 /異辛烷構成反膠團系統(tǒng) ， 通過反膠團萃取方式純化精制 α淀粉酶。最佳反應條件為 : 萃取溫度 40 ℃ ， 水相 組成為 NaCl mol/L， pH ， 有機相：無機相 = 1： 2， 振蕩時間 10min； 反萃取最佳條件為 :溫度 60℃， 水相組成為 KCl 3 mol/L， pH ,有機相：無機相 = 2： 1， 反萃取振蕩時間 10 min。在上述條件下 ， 經(jīng)過一個萃取與反萃取循環(huán)后 ， 淀粉酶的萃取率最高可達 90. 78%。雙水相技術具有處理容量大、能耗低、易連續(xù)化操作和工程放大等優(yōu)點。應用雙水相系統(tǒng) PEG／磷酸鹽分離純化 α－ 淀粉酶，增加 PEG 濃度有助于酶富集上相。同樣用 PEG／磷酸鹽雙水相體系從發(fā)酵液中直接萃取 分離低溫 α一 淀粉酶，分配系數(shù)及回收率分別為 和 87％。采用 PEG(聚乙二醇 )／硫酸銨雙水相體系，進行分離純化 α－ 淀粉酶，結果表明，在室溫下由 PEG 和硫酸銨所組成的雙水相體系，對 α－ 淀粉酶的回收率可達 ％，分配系數(shù)可達 。雙水相技術有著溶液粘度高、分相時間長，易造成界面乳化等缺點，給實際操作帶來很多問題。為了獲得高純度的 α 一 淀粉酶 ， 開始人們利用軟基質的離子交換色譜和親和色譜分離純化了 α淀粉酶的粗酶提取液。但是 ， 軟基質色譜介質的機械強度小 ， 受壓易變形 ， 分析速度慢 ， 分離效率低 ， 柱壽命短 ， 固定 相對 PH、離子強度和壓力非常敏感 ， 反復使用時配體碎片容易脫落。由于以上缺點 ， 軟基質色譜有逐漸被硬基質色譜取代的趨勢。在硬基質色譜應用方面 ， 李華儒等首次合成一種對 α一 淀粉酶具有特異親和能力的色譜介質 ， 并成功地分離純化了工業(yè)粗酶 ， 獲得了高純度產(chǎn)品 ， 其活性回收率 88%， Kato 等也用高效疏水色譜純化了 α淀粉酶粗品 ， 回收率為90%。之后其采用高效液相離子交換色譜純化 α一 淀粉酶很好地分離了 α一 淀粉酶粗品 ， 其活性回收率高達 96%， 比活性達 388μ/mg 蛋白質。此法的研究成功為大規(guī)模制備高純度 α一 淀粉酶提供了一個新 工藝路線 。 實驗方法 第 10 頁 （ 1）反膠團系統(tǒng)的配置 將適當比例的正丁醇和異辛烷加入比色管 ， 搖勻。再加入適量 CTAB， 放入加熱套中加熱溶解 ， 搖勻 ， 使其均勻分布于有機相 ，得到澄清透明穩(wěn)定的反膠團系統(tǒng)。 （ 2）前萃取 將 α淀粉酶溶解于不同緩沖液中 ， 稀釋 ， 并用 4 層潔凈紗布濾清 。 磷酸氫二鈉 檸檬酸緩沖液 ， pH(pI)， 構成初始水相。將反膠團相和水相置于 50 mL 帶塞三角燒瓶中 ， 在振蕩器上劇烈搖晃 后 (250 r/min, 10 min)， 傾入離心管 ， 進行離心 (3 500 r/min, 5 min)， 用滴管小心地將兩相分開取上層有機相待用。 （ 3）反萃取 用去離子水配制適當 pH 值 (pHpI)和離子強度的緩沖液作為反萃取水相 ， 與前萃取所得的有機相混合 ， 放入恒溫水浴鍋加熱片刻 ， 在振蕩機上劇烈搖晃后 (250 r/min， 10 min)， 傾入離心管 ， 進行離心 (3500 r/min， 5 min)。用滴管小心地將兩相分開 ， 下層水相即為純化的淀粉酶。 分析和測試方法 （ 1） α淀粉酶活力的測定 ， 采用國標 QB/1803— 93， 對萃取前的粗酶以及萃取后的精制酶的酶活力進行測定 ， 依據(jù)所附“吸光度和淀粉酶酶濃度對照表” 。將吸光度換算為酶活濃度 c， 進而求出酶活 D660。 按下式計算 ： D660=c n 式中 ： c——— 測試酶液濃度 ， u/g； n——— 樣品的稀釋倍數(shù) ， g/mL。 平行試驗相對誤差不得超過 2%。 （ 2） α淀粉酶萃取率 E： 按下式計算 ： E=反萃取水相中酶的總活力分相前加入的酶總活力 100% 在我們?nèi)齻€不懈努力的合作下，終于完成了關于 α淀粉酶的生產(chǎn)工藝的資料 。這是一項很巨大的任務，需要團體的合作和信任。我們由此對 α淀粉酶更加了解，也為我們的學業(yè)提供了很大的幫助。 綜上所述，各種 α淀粉酶作為一種重要的工業(yè)用酶，已經(jīng)廣泛應用于淀粉及淀粉基工業(yè)中，且已經(jīng)取得了很好的使用效果。對縮短生產(chǎn)周期，提高產(chǎn)品得率和原料的利用率，提高產(chǎn)品質量和節(jié)約糧食資源，都有著極其重要的作用。但由 第 11 頁 于不同來源 α淀粉酶的性質上 的差異，導致了其應用受到一定的局限，如耐高溫 α淀粉酶在高溫條件下才能發(fā)揮最大活力，在低溫和中溫時其利用效率很低，從而限制了其應用范圍。另外，不同 α淀粉酶應用于食 品中，其安全性有的尚未完全肯定。因此，在以后的研究中，可以通過化學方法或生物方法對 α淀粉酶進行改性，擴展其使用的范圍，提高使用效率。無論如何，隨著科技的發(fā)展、研究的深入， α淀粉酶將會得到更加廣泛的應用。 5. 結論： 提高 作用來實現(xiàn) 。 經(jīng) NTG 反復多次對 B. subtilis 菌株進行誘變處理 ， 在一定程度上打破了酶合成調控機制和酶分泌調節(jié)機制 ， 從而獲得了 α淀粉酶高產(chǎn)變異株 。CTAB/正丁醇 /異辛烷反膠團系統(tǒng)萃取工業(yè)級 α淀粉酶的最佳 條件為 ： 萃取溫度40℃ ， 水相組成為 NaCl0. 03 mol/L， pH 12. 0， 有機相∶無機相 =1∶ 2， 振蕩時間 10 mi； 反萃取溫度 60℃ ， 反萃取水相組成為 ： KCl3 mol/L， pH 4. 0， 有機相 ：無機相 =2： 1， 反萃取振蕩時間 10 min。在上述條件下 ,經(jīng)過一個萃取與反萃取循環(huán)后 ， α淀粉酶的萃取率最高可達 %。反膠團萃取分離酶具有單級萃取率高、能實現(xiàn)連續(xù)操作等優(yōu)點 ， 可望發(fā)展成為一種生物產(chǎn)品分離的新方法 。 此上所訴由嚴紅俊所做