【正文】 醇。從混雜微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過(guò)程稱(chēng)為微生物分離與純化。 專(zhuān)業(yè)資料分享 土壤中產(chǎn)淀粉酶芽胞桿菌的篩選及其淀粉酶活力的測(cè)定設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)方案一、綜述： 淀粉酶是淀粉降解酶。一般地說(shuō)，在土壤表面，由于日光照射及干燥等因素的影響，微生物不易生存，離地表10 cm～30 cm的土層中菌數(shù)最多，隨土層加深，菌的數(shù)量減少【5】。加入瓊脂,加熱煮沸，使瓊脂溶化。C溫室中培養(yǎng)約20h.。菌種的鑒定、顏色、干濕情況、形態(tài) 、高度 、透明程度、邊緣、是否易被挑起、氣味等。淀粉瓊脂平板不宜保存于冰箱，因而以臨用時(shí)制備為妥。每管分別加入40％NaOH溶液10～20滴，并加等量α奈酚，振蕩試管，以使空氣中的氧溶入，置37℃恒溫箱中保溫15～30min后，若培養(yǎng)液呈紅色，（用“＋”表示）；若不呈紅色，（用“－”表示）。酶活力根據(jù)下式計(jì)算：酶活力（u/ml）=(Rr)/R*50*D式中R、r分別表示對(duì)照和反應(yīng)液的光密度，D為酶的稀釋倍數(shù)。進(jìn)行染色鑒定時(shí)，都應(yīng)有已知的對(duì)照菌種在同等條件下染色，然后進(jìn)行對(duì)比記錄結(jié)果。種子液以2 %接種量接種于產(chǎn)酶液體培養(yǎng)基50/500mL ,相同條件培養(yǎng)72h ,發(fā)酵8000r/min，離心10min ,取上清液測(cè)酶活, 每個(gè)樣品重復(fù)3 次,最后結(jié)果取平均值。立即檢視結(jié)果，陽(yáng)性反應(yīng)（淀粉被分解）為瓊脂培養(yǎng)基呈深藍(lán)色、菌落或培養(yǎng)物周?chē)霈F(xiàn)無(wú)色透明環(huán)、或肉湯顏色無(wú)變化。（注：觀察芽孢的形狀和位置，查伯杰細(xì)菌手冊(cè)）復(fù)染：滴加番紅染色液，染3－5分鐘，水洗后用吸水紙吸干。37℃下恒溫培養(yǎng)24h。加入瓊脂,加熱煮沸，使瓊脂溶化。二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?．了解生物分離提純的原理和方法技術(shù)2．掌握從土壤中篩選產(chǎn)淀粉酶菌株的原理和方法、綜合分析問(wèn)題解決問(wèn)題和判斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果的能力。淀粉酶種類(lèi)繁多,特點(diǎn)各異,可應(yīng)用于造紙、印染、釀造、果汁和食品加工、醫(yī)藥、洗滌劑、工業(yè)副產(chǎn)品及廢料的處理、青貯飼料及微生態(tài)制劑]等多種領(lǐng)域。因此，純培養(yǎng)的確定除觀察其菌落特征外，還要結(jié)合顯微鏡檢測(cè)個(gè)體形態(tài)特征后才能確定，有些微生物的純培養(yǎng)要經(jīng)過(guò)一系列分離與純化過(guò)程和多種特征鑒定才能得到。每個(gè)環(huán)境的土樣裝1個(gè)錐形瓶，共2個(gè)，同時(shí)將其分為4組，編號(hào)AB。實(shí)驗(yàn)室里，四個(gè)平板均加入碘液，立即觀察記錄陽(yáng)性和陰性菌落所在位置，并可同時(shí)記錄透明圈的大小。 在上述各平板中分別劃線接種不同的菌種，每個(gè)菌種重復(fù)接種六個(gè)平板。注意接種的整個(gè)過(guò)程中，不能人為的制造氣泡，若發(fā)酵管內(nèi)有氣泡，則輕輕甩動(dòng)發(fā)酵管直至氣泡消失。 要嚴(yán)格按照培養(yǎng)基配方配制培養(yǎng)基，防止雜菌污染。嚴(yán)格無(wú)菌操作，防止污染情況的發(fā)生。接種后，每一管外包一層無(wú)菌紙，以防污染。（“—”不生長(zhǎng)，“+”生長(zhǎng)較差 ， “++”生長(zhǎng)一般，“+++”生長(zhǎng)良好。否則繼續(xù)進(jìn)行劃線分離，培養(yǎng)后再經(jīng)革蘭氏染色鏡檢直至得到純種桿菌后進(jìn)行芽孢染色。取已稀釋成101土壤液，用無(wú)菌的移液器吸取1mL土壤懸液加入102的無(wú)菌水的試管