從土壤中分離產(chǎn)淀粉酶的芽孢桿菌實驗方案說明-預(yù)覽頁
【正文】 后加入指示劑，混勻后分裝試管，121℃高溫滅菌15min。芽孢染色：5%孔雀綠溶液, 石炭酸復(fù)紅液。②加熱篩選有芽孢的菌：將2個錐形瓶加塞、包扎、搖勻（無菌室里），利用恒溫水浴裝置100℃左右水浴，水浴鍋溫度恒定后維持15min（制懸液時就應(yīng)先開始加熱），制成101 g/ml的土壤懸液③梯度稀釋菌懸液：再分別另取裝有9mL無菌水試管5支，用記號筆編上101010105。④涂布平板 用一支新的無菌槍頭，由低濃度開始，從各濃度土壤稀釋液中各吸取100ul，對號較均勻地放入已寫好稀釋度的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板上，用灼燒冷卻后的無菌玻璃涂棒涂勻。角，并將接種環(huán)上剩余物燒掉，待冷卻后通過第1次劃線部分作第2次平行劃線，再用同法通過第2次平行劃線部分作第3次平行劃線和通過第3次平行劃線部分作第4次平行劃線（如右圖）。將純化得到的單菌落分為兩部分，其中一部分接種到培養(yǎng)基內(nèi)，用以保存菌種，另一部分用來做染色實驗。根據(jù)所記錄的陽性菌的編號，利用另一組中的營養(yǎng)瓊脂平板上其對應(yīng)的菌落繼續(xù)劃線接種，培養(yǎng)后將出現(xiàn)的形態(tài)特征不一致的菌落進行編號，然后挑取部分出來進行革蘭氏染色鏡檢，若發(fā)現(xiàn)視野內(nèi)出現(xiàn)形態(tài)、大小、顏色一致且為桿菌的菌體，則將其對應(yīng)的菌種劃線接種到新的營養(yǎng)瓊脂平板上，標記，37℃下培養(yǎng)24h。媒染：先用新配的路哥氏碘液沖去殘水，而后用其覆蓋涂面1分鐘，后水洗。芽孢染色染色鏡檢：傾去染液，待玻片冷卻后，水沖洗至孔雀綠不再褪色為止。制片干燥后用油鏡觀察。（每種菌接3管，標上相同編號也要與平板上菌落編號相對應(yīng)）。各取每個菌種兩套平板倒置于4℃ （冰箱）、37℃（或者室溫），60℃下保溫培養(yǎng)24 小時，觀察細菌的生長狀況。1℃培養(yǎng)2448h，或于20℃培養(yǎng)5天。淀粉水解系逐步進行的過程，因而試驗結(jié)果與菌種產(chǎn)生淀粉酶的能力、培養(yǎng)時間，培養(yǎng)基含有淀粉量和pH等均有一定關(guān)系。糖類發(fā)酵試驗（葡萄糖、木糖和乳糖發(fā)酵）用小砂輪輕輕切割發(fā)酵管沒有標簽和標識的另外一端，注意保留標簽和糖的名稱。若氣泡不能退去，則該管作廢應(yīng)重做一管。觀察記錄：與對照管比較，若接種培養(yǎng)液保持原有顏色，其反應(yīng)結(jié)果為陰性，表明該菌不能利用該種糖，記錄用“－”表示；如培養(yǎng)液呈黃色，反應(yīng)結(jié)果為陽性，表明該菌能分解該種糖產(chǎn)酸，記錄用“＋”表示。接種培養(yǎng) 以無菌操作分別接種少量菌苔至以上相應(yīng)試管中，空白對照管不接菌，置37℃恒溫箱中，培養(yǎng)24h。吲哚試驗 試管標記 取裝有蛋白胨水培養(yǎng)液的試管，編號。耐鹽性試驗將分離獲得的細菌分別接種在NaCl濃度為2%，10%，20%，25%，的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中,置37℃下培養(yǎng),觀察生長情況 [7]。若培養(yǎng)基仍為綠色則為陰性反應(yīng)，以“－”表示【8】。在620nm處測光密度。確定在40℃ 5min內(nèi)水解1mg淀粉的酶量為一個活力單位。觀察結(jié)果時要注意滴加藥量及反應(yīng)時間。不同培養(yǎng)基各有配制特點，要注意具體操作。 完美DOC格式整理
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