土壤中產(chǎn)淀粉酶芽孢桿菌的篩選與鑒定和淀粉酶活測定-文庫吧資料
2025-05-22 02:53本頁面
【正文】 等物質在高溫條件下變性，因此不能直接高溫（121℃）蒸汽滅菌，應當根據(jù)材料的不用采取不同的方法，例如酪素和酪氨酸在110℃滅菌，蛋黃在無菌條件下取用即可 ，兩種菌對偏酸性的抗逆性較低；溶菌酶試驗表明編號2C的菌株對溶菌酶具有一定的抗逆性；，通過渾濁度可以直觀地對比出菌株生長或者不生長，但是對于菌株的生長情況比較難以把握，在溶菌酶試驗中可以使用固體培養(yǎng)基，用小濾紙片浸沒在溶菌酶中，通過透明圈的大小來判斷抑制情況，編號1B的菌種能對檸檬酸鹽進行利用，但該實驗一直到第五天才出現(xiàn)輕微現(xiàn)象，第六天才出現(xiàn)明顯現(xiàn)象，說明芽孢桿菌對檸檬酸鹽的利用能力較低，需要長時間培養(yǎng)觀察才能做出判定，僅是初步鑒定，缺乏比較嚴格的重復和對照，部分項目可能存在誤差，部分項目由于條件限制沒有實施，實際操作中對微生物的種的鑒定還應該進行基因檢測和鑒定才能最終判斷 我們選取淀粉檢驗時透明圈較大的2C作為酶活檢測對象，實際結果酶活力較并不高；通過課堂知識和老師講解，我們知道種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基的配方不同是由于微生物的最適生長條件和最適產(chǎn)物條件的不同，對于我們選用的菌株，要得出最適的發(fā)酵配方是需要建立大量的實驗基礎上的，我們通過查詢資料得帶的配方只能作為參考使用，實際上可能并非該菌株的最優(yōu)配方；因此測得的酶活力相應的只能作為一個參考量，并非該菌株的酶活的最優(yōu)結果6．綜合討論通過本次實驗，我們對于一個實驗，從開始查閱資料、設計實驗到實驗操作、記錄和總結有一個比較清晰的了解，同時也確實體會到了做實驗的辛苦。 加發(fā)酵液后加濃鹽酸至pH=，使酶失活，其余步驟同上，搖勻，用分光光度計在波長520nm處進行比色，記錄吸光值，從麥芽糖標準曲線中查出麥芽糖含量，然后進行結果計算結果計算。根據(jù)《伯杰氏細菌學手冊》及各個鑒定項目的結果，給所挑選的菌株鑒定到種 +100mL蒸餾水，5－二硝基水楊酸試劑2ml,沸水浴準確煮沸5min，取出冷卻，用蒸餾水稀釋至20ml，記錄吸光值，麥芽糖含量為橫坐標繪制標準曲線。用“＋”表示有透明圈，反之“”。若培養(yǎng)基為綠色則為陰性，以“—”表示。，若有，則菌株有鞭毛，但是如果是需氧型的話會在培養(yǎng)基表面上形成一薄膜；若是不會運動的細菌，培養(yǎng)基中的穿刺線很清晰，直立生長，則無鞭毛。 VP試驗℃溫箱中培養(yǎng)24h％NaOH溶液1020d，再加入等量ɑ酚萘在37℃溫箱中保留15min，若培養(yǎng)液變紅，則為陽性，用“＋”表示，反之。觀察其形態(tài)特征（大小、顏色、干濕、邊緣、質地、氣味、是否易被挑起） 單染色（桿狀，排列方式，大?。?革蘭氏染色（陽性）芽孢染色（菌體染成紫色，芽孢為綠色，產(chǎn)孢位置，大小等） pH=：==(其中pH=） ℃溫箱中培養(yǎng)24h“＋”表示，代表該菌能耐酸，反之“”。標明菌種產(chǎn)地。接種至斜面培養(yǎng)基上進行擴增培養(yǎng)，每種菌接種兩支試管，一支保存，一支進行各項生化鑒定。(芽孢染色要培養(yǎng)30h，我們直接從鑒定淀粉水解酶的培養(yǎng)基中挑出菌進行了芽孢染色)。 涂片干燥固定初染（加草酸銨結晶紫染液12min后，倒去沖洗至無色）媒染（碘液沖去涂面1min，水洗）脫色（95％酒精，25s，立即沖洗）復染（番紅染液1min，水洗吸干）鏡檢。（第五天）： 挑選有透明圈的菌落，再進行革蘭氏染色和芽孢染色，驗證菌落為紫色，革蘭氏陽性菌且有綠色芽孢出現(xiàn)。記錄并編號。： 將分離的單個菌落接種至淀粉水解培養(yǎng)基上，每個培養(yǎng)基接種3個菌落，每種菌接種一個平板。若出現(xiàn)不同菌種則說明并未純化，則繼續(xù)劃線培養(yǎng)直至鏡檢菌落單一。（第二三四天） 將第四次劃線得到的單個菌落進行單染色。將接種過的平板倒置于37℃溫箱中培養(yǎng)24h。在所選平板中選取形態(tài)大小顏色等不同的菌落6~8種，分別用接種環(huán)以無菌操作挑起，分別進行分區(qū)劃線(3個區(qū))并做標記。并置于37℃溫箱中培養(yǎng)24h。,103,104的懸浮液進行涂布平板(每種樣品的每個稀釋度涂布3個平板)。并同法完成另一份樣品的稀釋。：(錐形瓶中放有玻璃珠)2中(即為稀釋的土壤懸浮液)，塞好棉塞，充分振蕩20min，使土壤中菌體或芽孢子均勻分散，并置于80℃恒溫水浴中保持20min，/100℃恒溫水浴中保持10min，以殺死非芽孢的菌體。） 1％HCl、蒸餾水、結晶紫染色液、草酸銨結晶紫染液、番紅染液、5％孔雀綠染色、碘液、95％乙醇、乙醚、40％NaOH、ɑ酚萘、3,5二硝基水楊酸（DNS試劑配制）、1mg/ml麥芽糖溶液鑰匙、錐形瓶、水浴鍋、膠頭滴管、移液槍、試管、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、玻璃涂棒、酒精燈、高壓蒸汽滅菌鍋、恒溫培養(yǎng)箱、錐形瓶4個（2個種子培養(yǎng)、2個發(fā)酵培養(yǎng)）、試管無菌防水紙袋、記號筆、標簽、報紙、橡皮筋3實驗方法與步驟 樣品1：生化樓樓下河道邊樣品2：菊苑飯?zhí)煤箝T附近近㎡為單位采用五點取樣法在各點采樣，距表層515㎝，用鑰匙在五點處各取1的土壤，裝入無菌防水紙袋，封口。7H2O(%)FeSO47H2O)() 磷酸二氫銨(1g) 磷酸氫二鉀 (1g)%溴麝香草酚藍溶液 (40mL) 檸檬酸鈉(5g)蒸餾水(1000mL) pH 牛肉膏(3g) 蛋白胨(10g) 氯化鈉(5g)蒸餾水(1000ml) 瓊脂(20g)pH 可溶性淀粉（%） 酵母膏（%）蛋白胨（%） NaCl（%） KH2PO4（%）蒸餾水（100mL）pH=：可溶性淀粉（%）酵母膏（%）蛋白胨（%） NaCl（%） KH2PO4（%）CaCl2在一定范圍內(nèi)，還原糖的量與棕紅色物質顏色深淺的程度量呈一定的比例關系，在540nm波長下測定棕紅
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