蛋白質(zhì)的基本機(jī)構(gòu)和功能-資料下載頁
2025-05-02 13:42本頁面
【正文】 抗體或致敏淋巴細(xì)胞受體發(fā)生特異性結(jié)合的物質(zhì)。 ? 抗體： 機(jī)體中因抗原刺激而產(chǎn)生的能與相應(yīng)抗原特異結(jié)合并具免疫功能的免疫球蛋白。 ? 單克隆抗體： 由針對 某一個(gè)特定抗原決定簇 而分化、增殖而來的 B淋巴細(xì)胞群合成并分泌的抗體。 六、蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng) 1. 雙縮脲反應(yīng)： ? 肽鍵 與雙縮脲試劑反應(yīng)呈紫色； 氨基酸無此反應(yīng) ，可用于檢查蛋白質(zhì)的水解程度。 ? 堿性溶液中與 Cu2+產(chǎn)生藍(lán)色， mg級測定 2. 茚三酮反應(yīng) : ? 酸性條件下，與茚三酮共熱產(chǎn)生藍(lán)紫色 3. Folin— 酚試劑反應(yīng) ? 堿性 +Cu2++磷鉬酸 磷鎢酸 → 藍(lán)色 ? 范圍 :25250μg(Tyr,Trp的反應(yīng) ) 1. 紫外分光光度法 : ? 280nm, ? (樣品含核酸時(shí) )蛋白質(zhì) (mg/ml)= 2. 福林 酚試劑法 : ? 堿性 +Cu2++磷鉬酸 磷鎢酸 → 藍(lán)色 ? 范圍 :25250μg(Tyr,Trp的反應(yīng) ) 七、蛋白質(zhì)的含量測定 3. Biuret法： ? 蛋白質(zhì) +堿性 +Cu2++BCA試劑 (4,4‘二羧酸 2,2’二喹啉鈉 )→ 紫色 (562nm) ? 范圍 :101200μg/ml 4. Bradford蛋白分析法 : ? 考馬斯亮藍(lán) G250+乙醇 +酸性 → 淡紅色 +蛋白質(zhì) →藍(lán)色 (595nm) ? 范圍 :10100μg/ml ? 肽鍵 +堿性 +Cu2+→ 紫紅色 ? 范圍 : ? 1g氮相當(dāng)于樣品含有 第四節(jié) 蛋白質(zhì)的分離純化 一、蛋白質(zhì)的提取 1. 選材： 新鮮、富含目的蛋白且來源方便 2. 組織細(xì)胞的粉碎： 胞內(nèi)及膜中蛋白 ? 物理法：如超聲、勻漿、加砂研磨、高壓擠壓等 ? 化學(xué)法：如 EDTA、 SDS等 ? 酶法：如自溶法、外加酶法（纖維素酶、果膠酶、溶菌酶等） 3. 提?。?適當(dāng)溶媒、適當(dāng)條件、適當(dāng)提取時(shí)間和次數(shù) 二、蛋白質(zhì)的分離純化 （一）根據(jù)溶解度不同 1. 等電點(diǎn)沉淀 :蛋白質(zhì)在 pI時(shí)溶解度最小 2. 鹽析 (分級 ):大量中性鹽如 (NH4)2SONa2SO NaCl加入蛋白質(zhì)溶液中 ,破壞蛋白質(zhì)在水溶液中的穩(wěn)定性因素而沉淀 .各種蛋白質(zhì)鹽析時(shí)需鹽濃度及 pH不同 . 3. 低溫有機(jī)溶劑沉淀 (分級 ):降低水的介電常數(shù) （二）根據(jù)分子大小不同 1. 透析和超濾 (分級 ):根據(jù)分子量的大小，用透析袋或?yàn)V膜將大、小分子物質(zhì)分開 2. 凝膠過濾 (分子排阻層析 ):又稱分子篩，柱內(nèi)填滿帶有小孔的顆粒，一般為葡聚糖 3. 密度梯度離心 :根據(jù)粒子密度差進(jìn)行分離。蔗糖 ,CsCl (三 )根據(jù)電離性質(zhì)不同 :蛋白質(zhì)泳動的方向和速度取決于蛋白質(zhì)分子所帶電荷的性質(zhì)、數(shù)量及質(zhì)點(diǎn)的大小和形狀 ? 1)醋酸纖維素薄膜電泳 ? 2)聚丙烯酰胺凝膠電泳 (PAGE) ? 3)等電聚焦電泳 ? 4)免疫電泳 （如下頁圖） ? 1)離子交換纖維素 ? 2)離子交換凝膠 ? 3)大孔型離子交換樹脂 (四 )根據(jù)配基特異性 ? 親和層析 : 根據(jù)生物大分子與其配基間特異的親和結(jié)合 (可逆 ) ? 如 AgAb、蛋白 A與其補(bǔ)體、酶與其底物或抑制劑、互補(bǔ)的核酸鏈間等 三、蛋白質(zhì)的純度鑒定 :單一洗脫峰 → 層析純 (HPLC) :單一區(qū)帶 → 電泳純 高效毛細(xì)管電泳 (HPCE) :→ 免疫純 放射免疫分析法 (RIA) 酶標(biāo)記免疫分析法 (EIA) 半飽和硫酸銨 離心 球蛋白沉淀 血清 血清 離心 飽和硫酸銨 白蛋白沉淀 不同濃度硫酸銨對血清的鹽析結(jié)果 返 回 分子篩層析原理示意圖 返 回 密度梯度離心示意圖 返 回
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1