蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能(2)-資料下載頁
2025-05-01 18:07本頁面
【正文】 ?超濾法：應用正壓或離心力使蛋白質(zhì)溶液透過有一定截留分子量的超濾膜，達到濃縮蛋白質(zhì)溶液的目的。 丙酮沉淀、鹽析及免疫沉淀 ?使用丙酮沉淀時，必須在 0～ 4℃ 低溫下進行，丙酮用量一般 10倍于蛋白質(zhì)溶液體積。蛋白質(zhì)被丙酮沉淀后，應立即分離。除了丙酮以外，也可用乙醇沉淀。 ?鹽析 (salt precipitation)是將硫酸銨 、 硫酸鈉或氯化鈉等加入蛋白質(zhì)溶液 ， 使蛋白質(zhì)表面電荷被中和以及水化膜被破壞 ， 導致蛋白質(zhì)沉淀 。 ?免疫沉淀法：將某一純化蛋白質(zhì)免疫動物可獲得抗該蛋白的特異抗體。利用特異抗體識別相應的抗原蛋白，并形成抗原抗體復合物的性質(zhì)，可從蛋白質(zhì)混合溶液中分離獲得抗原蛋白。 電泳： 帶電粒子在電場中向相反電極移動的現(xiàn)象。 影響電泳速度和方向的因素有： 蛋白質(zhì)顆粒所帶電荷的性質(zhì)、數(shù)量及分子的大小、形狀。 ?幾種重要的蛋白質(zhì)電泳 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳：常用于蛋白質(zhì)分子量的測定。 等電聚焦電泳：通過蛋白質(zhì)等電點的差異而分離蛋白質(zhì)的電泳方法。 雙向凝膠電泳：是蛋白質(zhì)組學研究的重要技術。 層析 待分離蛋白質(zhì)溶液（流動相）經(jīng)過一個固態(tài)物質(zhì)（固定相）時，根據(jù)溶液中待分離的蛋白質(zhì)顆粒大小、電荷多少及親和力等，使待分離的蛋白質(zhì)組分在兩相中反復分配，并以不同速度流經(jīng)固定相而達到分離蛋白質(zhì)的目的 。 ?蛋白質(zhì)分離常用的層析方法 離子交換層析：利用各蛋白質(zhì)的電荷量及性質(zhì)不同進行分離。 凝膠過濾 (gel filtration)又稱分子篩層析：利用各蛋白質(zhì)分子大小不同分離。 超速離心 ?超速離心法(ultracentrifugation)既可以用來分離純化蛋白質(zhì)也可以用作測定蛋白質(zhì)的分子量。 ?蛋白質(zhì)在離心場中的行為用沉降系數(shù) (sedimentation coefficient, S)表示 ,沉降系數(shù)與蛋白質(zhì)的分子量和形狀相關 。 三、多肽鏈中氨基酸序列分析 ?改進的 Sanger法 分析已純化蛋白質(zhì)的氨基酸殘基組成 測定多肽鏈的氨基末端與羧基末端為何種氨基酸殘基 把肽鏈水解成片段，分別進行分析 測定各肽段的氨基酸排列順序，一般采用 Edman降解法 一般需用數(shù)種水解法，并分析出各肽段中的氨基酸順序，然后經(jīng)過組合排列對比，最終得出完整肽鏈中氨基酸順序的結(jié)果。 ?通過核酸推演的方法 按照三聯(lián)密碼的原則推演出氨基酸的序列 分離編碼蛋白質(zhì)的基因 測定 DNA序列 排列出 mRNA序列 ?有關蛋白質(zhì)的純度鑒定和含量測定 ?蛋白質(zhì)純度：層析純、電泳純、免疫純 純度標準取決于測定方法的檢測極限。 ?蛋白質(zhì)定量方法 克氏定氮法 Folin酚法（ Lowry法） 雙縮脲法 考馬斯亮蘭染色法 紫外分光光度法 四、蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)測定 ?二級結(jié)構(gòu)測定：圓二色光譜法 ?三級結(jié)構(gòu)測定： X射線衍射法 (Xray diffraction) 核磁共振技術 (nuclear magic resonance, NMR) 第五節(jié) 蛋白質(zhì)的分類 ?根據(jù)蛋白質(zhì)組成成分 ?根據(jù)蛋白質(zhì)形狀 ?根據(jù)蛋白質(zhì)功能 單純蛋白質(zhì) 結(jié)合蛋白質(zhì) = 蛋白質(zhì)部分 + 非蛋白質(zhì)部分 纖維狀蛋白質(zhì) 球狀蛋白質(zhì) 活性蛋白質(zhì) 非活性蛋白質(zhì) 小 結(jié) ?掌握： α 氨基酸通式； 20種氨基酸的名稱、三字符號及結(jié)構(gòu)；肽鍵、肽鏈、氨基酸殘基及肽鏈書寫規(guī)則；蛋白質(zhì)一至四級結(jié)構(gòu)的概念及穩(wěn)定因素；蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關系；模體、結(jié)構(gòu)域、分子伴侶等概念。 ?熟悉：谷胱甘肽的結(jié)構(gòu)與功能；常見的蛋白質(zhì)分離純化方法；蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)。 ?了解：氨基酸的理化性質(zhì)及蛋白質(zhì)的分類；多肽鏈中氨基酸序列分析和蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)測定。
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