核酸的分離純化ppt課件-資料下載頁
2025-05-01 01:09本頁面
【正文】 可以還原 RNase中的二硫鍵 ， 有利于 RNase的變性 、水解與滅活 一、 RNA制備的條件與環(huán)境 二、酸性異硫氰酸胍 酚 氯仿一步法 ? 以含異硫氰酸胍 、 β 疏基乙醇和十二烷基肌氨酸鈉的 變性溶液 裂解細胞 ? 在 ， 酚 /氯仿抽提細胞 裂解溶液 ? 通過異丙醇沉淀與 75%的乙醇洗滌而獲得總 RNA 二、酸性異硫氰酸胍 酚 氯仿一步法 總 RNA產(chǎn)量取決于標本的起始量 ， 每 mg組織大約能制備 4～ 7181。g總 RNA， 每 106個細胞大約能制備 4～ 10181。g總 RNA。 三、商品化試劑單相裂解法 ? 是異硫氰酸胍 酚 氯仿一步法的改進方案 ? 以 異硫氰酸胍 酚 的單相裂解液裂解細胞 ， 再加入 氯仿 后形成兩相 三、商品化試劑單相裂解法 ? 變性的 DNA與蛋白質介于兩相的交界面 ， 可使用乙醇和異丙醇分級沉淀出來 ? 保留于上層水相的 RNA， 通過異丙醇沉淀與 75%乙醇洗滌而制備 三、商品化試劑單相裂解法 目前 ， 該法已成為實驗室最常用的總 RNA提取法 ， 其產(chǎn)量及質量與酸性異硫氰酸胍 酚 氯仿一步法相當 。 四、 mRNA的分離純化 ? 除血紅蛋白及組蛋白的 mRNA外 ， 絕大多數(shù) mRNA在其 3180。末端帶有長短不同的 poly（ A） 尾巴 ? 利用堿基配對原則 ， 通過 oligo（ dT） 纖維素或 poly（ U） 瓊脂糖凝膠的親和層析 ， 可以很容易地從總 RNA制品中分離純化 mRNA （ dT） 纖維素柱層析法 （ dT） 纖維素柱離心法 （ dT） 纖維素液相結合離心法 四、 mRNA的分離純化 5180。m7G AAAAAAAAAAAA3 180。 3180。TTTTTTTTTTTTBiotin5180。 + 總 RNA中的 poly(A) +RNA分子 退火形成雜交體 5180。m7G AAAAAAAAAAAA3 180。 3180。TTTTTTTTTTTTBiotin5180。 鏈親和素標記的磁珠 + Streptavidin 磁 5180。m7G AAAAAAAAAAAA3 180。 3180。TTTTTTTTTTTTBiotin5180。 Streptavidin 磁 生物素與鏈親和素的特異性結合 磁性分離 5180。m7G AAAAAAAAAAAA3 180。 磁鐵 3180。TTTTTTTTTTTTBiotin5180。 Streptavidin 磁 洗滌與洗脫 水相 (含純化的 mRNA) 固相 生物素標記的 oligo(dT) 磁鐵 5180。m7G AAAAAAAAAAAA3 180。 3180。TTTTTTTTTTTTBiotin5180。 Streptavidin 磁 四、 mRNA的分離純化
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