酶的提取與分離純化(2)-資料下載頁
2025-05-26 22:01本頁面
【正文】 法 （ pH值測量法） ：產(chǎn)物之一是自由的酸性物質(zhì)或堿性物質(zhì)。多用 pH電極測。 ★ 常用終止反應(yīng)方法： ▼ 改變反應(yīng)最適條件： 加酸、堿、加熱 ▼ 加酶變性劑： 5％三氯乙酸 ★ 酶活力單位： 通常采用國際酶學(xué)委員會規(guī)定的單位。 在純化過程中，為了方便，可采用自行規(guī)定的單位，只要達(dá)到可比較的目的即可，如直接以光密度值表示。 ★ 2 蛋白質(zhì)濃度測定 ▼ 紫外吸收法：酪氨酸、色氨酸殘基中苯環(huán)有共軛雙鍵，在 A280有最大吸收。 特點(diǎn)： 簡便、快速、不損耗樣品，但干擾因素多。 ▼ 雙縮脲法：具有兩個(gè)或兩個(gè)以上肽鍵的化合物均有雙縮脲反應(yīng)。 優(yōu)點(diǎn)： 快速 .缺點(diǎn)：靈敏度差 ▼ 酚試劑 （ Folin酚） 測定法： 繁瑣，但靈敏度、準(zhǔn)確度高。 ▼ 染料結(jié)合法 （考馬斯亮藍(lán)染色法） ：又稱 Bradford法，靈敏、簡便、快速、干擾少，是常用的檢測法。 ★ 3 酶的純化指標(biāo) 純度 提純倍數(shù) 回收率 常用比活力表示酶的純度： 酶活力（ u/ml） 比活力＝ ——————————— 蛋白質(zhì)含量（ mg蛋白 /ml酶液） 比活力越高，酶純度也越好。 ★ 提 純倍數(shù) =提純后比活力 /提純前比活力 提純倍數(shù)越大，表示該方法純化效果越好。 回收率＝ 提純后酶總活力 /提純前酶總活力 100％ 表示提純過程中酶損失程度的大小。 回收率越高，損失越小。 總活力＝酶活力單位數(shù) ? 酶液總體積 即樣品中全部酶活力。 ★ 判斷一個(gè)分離純化方法的優(yōu)劣，常用總活力的回收率和比活力的提純倍數(shù) 兩個(gè)指標(biāo)。 回收率：反映酶的損失情況。 提純倍數(shù)：表示方法的有效程度。 一個(gè)好的純化步驟是回收率較高，提純倍數(shù)也較大。 ★ 4 純化表 ★ 提純倍數(shù) : 比活力 : 5/12= 11/3= 364/7=52 總活力 : 5 1000=5000 170 10=1700 產(chǎn)率 (回收率 ): 4800/5000=96% 1820/5000=% 1500/5000=30% 酶濃度 : 5000/1000=5 1820 /5=364 1700/10=170 思考題： 1 PAGE 和 SDS－ PAGE電泳的原理有何區(qū)別 ?應(yīng)用有何不同 ? 2 酶活力 酶比活 3 酶的純化效率通常采用哪些指標(biāo) ?它們?nèi)绾斡?jì)算 ?
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