酶的提取與分離純化(2)-預覽頁
【正文】 通常，緩沖液離子強度在 。 區(qū)帶電泳 :指有支持介質(zhì)的電泳，待分離物質(zhì)在支持介質(zhì)上分離成若干區(qū)帶。 ?以上兩種類型的電泳，由于介質(zhì)的孔徑度大，沒有分子篩效應，主要靠被分離物的電荷多少進行分離。分辨率高。 ★ 聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺單體 （ Acr）和交聯(lián)劑 N， N’ 甲叉雙丙烯酰胺 （ Bis） 在催化劑和加速劑作用下聚合的。 凝膠濃度和交聯(lián)度與孔徑大小的關(guān)系 ★ 樣品 分子量（ Da） 適宜的凝膠濃度（％） 蛋白質(zhì) 104 1～ 4 104 4 104～ 1 105 105～ 5 105 5 105 20～ 30 15～ 20 10～ 15 5～ 10 2～ 5 聚丙烯酰胺凝膠濃度參考表 ★ 2. 分離效應 PAGE根據(jù)其有無濃縮效應，分為： 連續(xù)電泳 采用相同孔徑的凝膠和相同的緩沖系統(tǒng) 不連續(xù)電泳 采用不同孔徑的凝膠和不同緩沖體系 電荷效應 不連續(xù) PAGE 分子篩效應 濃縮效應 連續(xù) PAGE ★ 電荷效應 :分離膠中，蛋白質(zhì)表面凈電荷不同，遷移率不同。 pH不同。 ★ 三、 SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳 十二烷基硫酸鈉－聚丙烯酰胺凝膠電泳（ sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis, SDS PAGE） 簡稱 SDS－ PAGE。 因此，蛋白質(zhì) — SDS復合物在凝膠中的遷移率不受蛋白質(zhì)原有電荷和形狀的影響，只與橢圓棒長度（蛋白質(zhì)分子量） 有關(guān)。插上梳子。 ： ? 考馬斯亮藍染色法 ? 銀染法 （靈敏度比前者高 100倍） 其它的染色方法：氨基黑、阿爾辛藍，過碘酸－ Schiff試劑（糖蛋白）。將干膠直接加入樣品溶液，吸水膨潤后，再過濾或離心分出濃縮的酶液。 一般用分子量大的 PEG,如 PEG 6,000和 PEG 20,000，以防止 PEG進入蛋白質(zhì)溶液。 三、酶的結(jié)晶 結(jié)晶 （ Crystallization） 是指物質(zhì)以晶體的狀態(tài)從蒸汽或溶液中析出的過程。 ★ 二、純化方案的評價 1 酶活力測定： 酶活力 (enzyme activity)又稱酶活性，即單位時間內(nèi)酶促反應的產(chǎn)物生成量 . 是酶催化某一化學反應的能力。 ▼ 量氣法 :酶促反應中產(chǎn)物或底物之一為氣體。 在純化過程中，為了方便，可采用自行規(guī)定的單位，只要達到可比較的目的即可，如直接以光密度值表示。 優(yōu)點： 快速 .缺點：靈敏度差 ▼ 酚試劑 （ Folin酚） 測定法： 繁瑣，但靈敏度、準確度高。 回收率＝ 提純后酶總活力 /提純前酶總活力 100％ 表示提純過程中酶損失程度的大小。 回收率：反映酶的損
環(huán)評公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1