生物技術(shù)實(shí)踐生物選修一資料知識(shí)復(fù)習(xí)圖解-資料下載頁
2025-04-17 07:20本頁面
【正文】 目的：紅細(xì)胞破裂，釋放出血紅蛋白注意：加入蒸餾水后紅細(xì)胞液體積與原血液體積要相同。加入甲苯的目的是溶解細(xì)胞膜，有利于血紅蛋白的釋放和分離分離血紅蛋白溶液過程：離心（2000r/min）目的：分離血紅蛋白和其他雜質(zhì)結(jié)果第1層(最上層)：甲苯層(無色透明) 第2層(中上層)：脂溶性物質(zhì)的沉淀層(白色薄層固體)第3層(中下層)：血紅蛋白的水溶液層(紅色透明液體) 第4層(最下層)：雜質(zhì)的沉淀層(暗紅色)透 析原理：透析袋能使小分子自由進(jìn)出，而將大分子保留在袋內(nèi)過程：血紅蛋白溶液裝入透析袋→將透析袋放入磷酸緩沖液中→透析12h目的：除去樣品中分子量較小的雜質(zhì)或用于更換樣品的緩沖液 化調(diào)節(jié)緩沖液面打開色譜柱下端的流出口，使柱內(nèi)凝膠面上的緩沖液緩慢下降到與凝膠面平齊，關(guān)閉出口加入蛋白質(zhì)樣品調(diào)節(jié)緩沖液面洗 脫收集分裝蛋白質(zhì)凝膠色譜柱裝填步驟：固定(色譜柱垂直固定在支架)→裝填(將凝膠懸浮液一次性裝填) →洗滌(目的：使凝膠裝填緊密)要求：緊密、均勻(否則，會(huì)在色譜柱內(nèi)形成無效的空隙，使本該進(jìn)入凝膠內(nèi)部的樣品分子從這些空隙中通過，攪亂洗脫液的流動(dòng)次序，影響分離的效果)裝填成功檢測(cè)：①凝膠是一種半透明的介質(zhì)，可在凝膠柱旁放一支與凝膠柱垂直的日光燈，檢查凝膠是否裝填得均勻。②加入大分子的有色物質(zhì)，觀察色帶移動(dòng)是否均勻、狹窄、平整。如紋路或是氣泡，輕輕敲打柱體以消除氣泡，否則重新裝柱。用吸管將透析后的樣品沿管壁環(huán)繞移動(dòng)加到色譜柱的頂端。加樣后，打開下端出口，使樣品滲入凝膠床內(nèi)，等樣品完全滲入凝膠層后，關(guān)閉出口加入20mmol/L的磷酸緩沖液到適當(dāng)高度連接緩沖液洗脫瓶，打開下端出口，進(jìn)行洗脫方法：待紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端時(shí)，用試管收集檢測(cè)分離是否成功：如果凝膠色譜柱裝填得很成功、分離操作也正確的話，能清楚地看到血紅蛋白的紅色區(qū)帶均勻、狹窄、平整，隨著洗脫液緩慢流出；如紅色區(qū)帶歪曲、散亂、變寬，說明分離的效果不好，這與凝膠色譜柱的裝填有關(guān)SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳(選做)胡 蘿 卜 素 的 提 取 一、胡蘿卜素基礎(chǔ)知識(shí)1．原理：根據(jù)胡蘿卜素易溶于有機(jī)溶劑的特點(diǎn)，可采取有機(jī)溶劑萃取的方法來提取胡蘿卜素。即將粉碎、干燥的植物原料用有機(jī)溶劑浸泡，使胡蘿卜素溶解在有機(jī)溶劑中，再蒸發(fā)出有機(jī)溶劑可獲得。2．萃取劑的選擇（1）有機(jī)溶劑的分類：分為水溶性（如乙醇和丙酮）和水不溶性（如石油醚、乙酸乙酯、乙醚、苯、四氯化碳）兩類。多數(shù)對(duì)人體有一定毒性。（2）選取萃取胡蘿卜素的有機(jī)溶劑的原則①具有較高的熔點(diǎn)，能夠充分溶解胡蘿卜素，并且不與水混溶；②萃取效率高；③對(duì)人無毒、不易燃、易與產(chǎn)品分離、不影響產(chǎn)品質(zhì)量萃取胡蘿卜素的有機(jī)溶劑應(yīng)該具有較高的沸點(diǎn)，能夠充分溶解胡蘿卜素且不與水混溶。另外，還要考慮對(duì)人體是否有毒性等安全問題。因乙醚的沸點(diǎn)較低，苯和四氯化碳對(duì)人體有毒性，所以本實(shí)驗(yàn)選用石油醚或乙酸乙酯作為萃取劑。胡蘿卜粉碎目的：便于胡蘿卜素能充分溶解注意：顆粒要小干燥萃取過濾濃縮胡蘿卜素目的：除去水分注意：控制溫度、時(shí)間目的：使胡蘿卜素充分溶解注意：①不能明火加熱②冷凝回流，防萃取液揮發(fā)影響因素：主要是萃取劑的性質(zhì)和量；其次是原料顆粒的大小、緊密程度、含水量、萃取的溫度、萃取時(shí)間的長(zhǎng)短等目的：除去顆粒等雜質(zhì)目的：除去有機(jī)溶劑 裝置：蒸餾裝置注意：①不能明火加熱②收集瓶口可用錫箔或牛皮紙遮蓋胡蘿卜素粗品的鑒定方法：紙層析法，原理：混合物各組分在層析液中的溶解度不同，隨層析液在濾紙上的擴(kuò)散速度不同，溶解度大的隨層析液在濾紙上的擴(kuò)散速度快，反之則慢，這樣，同一種物質(zhì)在濾紙上的擴(kuò)散速度相同，最終位置也相同。流程：量作基線：下端距底邊2cm處劃基線，在基線上取A、B、C、D四個(gè)點(diǎn)對(duì)照點(diǎn)樣：在A、D點(diǎn)點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)樣品，B、C點(diǎn)點(diǎn)提取樣品干燥層析：吹干濾紙溶劑，放入層析容器中層析對(duì)比觀察：對(duì)比觀察樣品色素點(diǎn)與標(biāo)準(zhǔn)色素點(diǎn)的異同。結(jié)果分析：如果萃取樣品中出現(xiàn)了和標(biāo)準(zhǔn)樣品一樣的層析帶，說明提取胡蘿卜素的實(shí)驗(yàn)成功。由于提取物中含有雜質(zhì)，萃取樣品的顏色可能比標(biāo)準(zhǔn)樣品的顏色淺，我們也可以通過顏色的比較，初步確定提取的胡蘿卜素的量。注意：①選擇干燥的濾紙，為防止操作時(shí)濾紙的污染，應(yīng)盡量避免用手直接接觸濾紙，可以戴手套進(jìn)行操作②點(diǎn)樣時(shí)應(yīng)注意點(diǎn)樣斑點(diǎn)不能太大()，如果用吹風(fēng)機(jī)吹干，溫度不宜太高，否則斑點(diǎn)會(huì)變黃③卷紙時(shí)注意濾紙兩邊不能互相接觸，以免因毛細(xì)現(xiàn)象導(dǎo)致溶劑沿濾紙兩邊的移動(dòng)加快，溶劑前沿不齊，影響效果二、操作流程及注意： 。11
教學(xué)教案相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1