生物技術(shù)實(shí)踐專題二-資料下載頁(yè)
2025-01-16 18:22本頁(yè)面
【正文】 布平板 ：將稀釋度為 104～ 106的菌懸液各取 mL，滴加在平板培養(yǎng)基上，用涂布器將菌液涂布均勻，在 30 ℃ 倒置培養(yǎng)，至菌落長(zhǎng)出。每個(gè)稀釋度下需涂布 3個(gè)平板，并注意設(shè)置對(duì)照。剛果紅染色的具體操作步驟參照課本［資料三］。 課題成果評(píng)價(jià) （一）培養(yǎng)基的制作是否合格以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落：對(duì)照的培養(yǎng)基在培養(yǎng)過(guò)程中沒(méi)有菌落生長(zhǎng)則說(shuō)明培養(yǎng)基制作合格。如果觀察到產(chǎn)生透明圈的菌落，則說(shuō)明可能獲得了分解纖維素的微生物。 （二）分離的結(jié)果是否一致：由于在土壤中細(xì)菌的數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于真菌和放線菌的數(shù)量，因此最容易分離得到的是細(xì)菌。但由于所取土樣的環(huán)境不同，學(xué)生也可能得到真菌和放線菌等不同的分離結(jié)果。 答案和提示 2中的實(shí)驗(yàn)流程有哪些異同？ 答：本實(shí)驗(yàn)流程與課題 2的流程的區(qū)別如下。課題 2是將土樣制成的菌懸液直接涂布在以尿素為惟一氮源的選擇性培養(yǎng)基上，直接分離得到菌落。本課題通過(guò)選擇培養(yǎng)，使纖維素分解菌得到增殖后，再將菌液涂布在選擇培養(yǎng)基上。其他步驟基本一致。 ？ 答：由于生物與環(huán)境的相互依存關(guān)系，在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌的含量相對(duì)提高，因此從這種土樣中獲得目的微生物的幾率要高于普通環(huán)境。 ？你認(rèn)為濾紙應(yīng)該埋進(jìn)土壤多深？ 答：將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對(duì)聚集，實(shí)際上是人工設(shè)置纖維素分解菌生存的適宜環(huán)境。一般應(yīng)將紙埋于深約 10 cm左右腐殖土壤中。 ，這兩種方法各有哪些優(yōu)點(diǎn)與不足？你打算選用哪一種方法？ 提示：參看本課題參考資料的內(nèi)容。 “濃縮”所需的微生物？ 答：在選擇培養(yǎng)的條件下，可以使那些能夠適應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁殖，而那些不適應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“濃縮”的作用。 練習(xí) ：流程圖表示如下。 土壤取樣 → 選擇培養(yǎng)（此步是否需要，應(yīng)根據(jù)樣品中目的菌株數(shù)量的多少來(lái)確定） → 梯度稀釋 → 將菌懸液涂布到有特定選擇作用的培養(yǎng)基上→ 挑選單菌落 → 發(fā)酵培養(yǎng) 參考資料 纖維素與淀粉都是由葡萄糖組成的，但組成兩者的葡萄糖的連接方式不同，因而使兩者的形態(tài)完全不同。纖維素是由葡萄糖分子按 β1,4糖苷鍵連接而成的，淀粉是由葡萄糖分子按 α1,4糖苷鍵連接而成的。 人類以淀粉為主要能量來(lái)源，但完全不能消化纖維素，而反芻動(dòng)物和大量的微生物則主要以纖維素為能量來(lái)源。這是因?yàn)?，在反芻動(dòng)物的瘤胃中生活著大量的可以分解纖維素的微生物。微生物產(chǎn)生的纖維素酶是一種復(fù)合酶，包括內(nèi)切酶（ Cx酶）、外切酶（ C1酶）和葡萄糖苷酶。內(nèi)切酶作用于無(wú)定型的纖維素區(qū)域，使纖維素?cái)嗔殉善?；外切酶又叫纖維二糖水解酶，它可以作用于纖維素的結(jié)晶區(qū)或小片段纖維素，從糖鏈末端開(kāi)始切掉兩個(gè)葡萄糖分子，產(chǎn)生纖維二糖；葡萄糖苷酶則將纖維二糖分解成葡萄糖。 剛果紅在篩選纖維素分解菌上的應(yīng)用已經(jīng)有超過(guò) 20年的歷史，在本課題中我們給出了兩種方法。 方法一是傳統(tǒng)的方法，缺點(diǎn)是操作繁瑣，加入剛果紅溶液會(huì)使菌落之間發(fā)生混雜；其優(yōu)點(diǎn)是這樣顯示出的顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用。 方法二的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便，不存在菌落混雜問(wèn)題，缺點(diǎn)是由于纖維素和瓊脂、土豆汁中都含有淀粉類物質(zhì)，可以使能夠產(chǎn)生淀粉酶的微生物出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)。但這種只產(chǎn)生淀粉酶的微生物產(chǎn)生的透明圈較為模糊，因?yàn)榕囵B(yǎng)基中纖維素占主要地位，因此可以與纖維素酶產(chǎn)生的透明圈相區(qū)分。方法二的另一缺點(diǎn)是：有些微生物具有降解色素的能力，它們?cè)陂L(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)降解剛果紅形成明顯的透明圈，與纖維素分解菌不易區(qū)分。
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