環(huán)境生物技術(shù)ppt課件-資料下載頁
2025-05-01 12:13本頁面
【正文】 為對照管發(fā)光強度的 3倍或以上即為陽性。 （二）發(fā)光細菌試驗 （一） SOS顯色試驗 ? SOS修復(fù)是指 DNA受到嚴重損傷、細胞處于危急狀態(tài)時所誘導(dǎo)的一種 DNA修復(fù) 方式，修復(fù)結(jié)果只是能維持基因組的完整性，提高細胞的生存率，但留下的錯誤較多，故又稱為錯誤傾向修復(fù)（ errorprone repair），使細胞有較高的突變率。 ? 致突變物 → DNA損傷 → 細菌 SOS修復(fù) → 測定SOS修復(fù)能力 → （通過大腸桿菌 PQ37菌株的顯色反應(yīng)） 二、 DNA損傷修復(fù)試驗 ? PQ37菌株的特點：操縱子融合方法構(gòu)建的，將SOS反應(yīng)網(wǎng)絡(luò)中的 sfiA基因與編碼 β 半乳糖苷酶的基因 lacZ融合在一起（報告基因）， β 半乳糖苷酶通過 Xgal培養(yǎng)基和 β – ONPG培養(yǎng)基來顯色，分別產(chǎn)生藍色和黃色。 ? 定性試驗： Xgal培養(yǎng)基平板，紙片點試 ,出現(xiàn)藍色色素即為陽性。 ? 定量試驗：液體培養(yǎng)基（含待測樣品） ,37176。 C,2h ,加入 β – ONPG顯色一定程度，終止反應(yīng)， 420nm處測吸光度。 R大于 2且具有劑量關(guān)系，則為陽性結(jié)果。 ? 應(yīng)用評價：敏感性與準確性與 Ames試驗相當(dāng)，某些方面優(yōu)于后者，可以相互補充。 （二）聚合酶缺陷型菌株試驗 致癌物使 DNA受損，聚合酶缺陷型菌株在 DNA受損后無修復(fù)能力，不能生存，抑菌圈出現(xiàn)。 P3478(polA),對照為野生型菌株 W3110(polA+)。 ? 點試法、混菌法，分別出現(xiàn)抑菌圈和有空白的生長線（抑菌現(xiàn)象）。 ? 對直接突變作用的烷化劑較為敏感，對需要代謝活化的化合物不敏感。 （三）重組缺陷型菌株試驗 重組缺陷型菌株失去修復(fù)能力， 致癌性物質(zhì)使 DNA受損，重組缺陷型菌株不能生長，原理與聚合酶缺陷型菌株試驗相似。 枯草芽孢桿菌 H17(recA+）對照，全線生長 枯草芽孢桿菌 M45(recA）試驗，抑菌現(xiàn)象 （四）溶源性細菌試驗 原理：原噬菌體 誘變劑 烈性噬菌體（噬菌體誘導(dǎo)現(xiàn)象） → 裂解非溶源性細菌（作為指示菌） → 固體培養(yǎng)基上出現(xiàn)噬菌斑 菌株： (λ )—— 溶源性 (S)—— 指示菌 方法：同時將兩菌株接種于一個培養(yǎng)基平板上，加入受試物，經(jīng)一夜培養(yǎng)，觀察噬菌斑。 三、 DNA重組試驗 致突變物 → DNA損傷 → 整個基因組的有絲分裂重組增強 → 釀酒酵母 D7的異點等位基因 (trp512/trp527)突變體（ trp)轉(zhuǎn)變?yōu)橐吧? 四、微生物致突變試驗與致癌物的確定 ? 大多數(shù)致癌物具有致突變作用，非致癌物不具有致突變作用。 —— 致癌可能性 ? 需要一組試驗配套進行檢測，包含 5種遺傳學(xué)終點試驗：ＤＮＡ完整性的改變，重排或交換，堿基序列改變（突變），染色體畸變，染色體分離改變。 ? 粗篩、報警，快速、靈敏、經(jīng)濟。
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