生物技術(shù)制藥ppt課件(2)-資料下載頁
2025-01-08 04:55本頁面
【正文】 雜交瘤細(xì)胞。 ? 基因工程方法 采用適當(dāng)?shù)慕宇^連接不同抗體的 VH和 VL區(qū)，使它們不能形成鏈內(nèi)的分子內(nèi)配對(duì)，讓其形成原抗體的分子內(nèi)配對(duì)，構(gòu)建雙特異性（ SCFV)2。 五、抗體融合蛋白 ? 類型有： （ 1）配基 配基型融合蛋白，如 CD4Fc?。（ 2） 配基 Ig嵌合型蛋白，如 IL2Ig。（ 3）配基 FV型嵌合蛋白，如 CD4FVCD3。（ 40受體FV型融合蛋白。（ 5）酶 抗體型融合蛋白。其中較為成熟的是配基 Ig型嵌合蛋白，而酶 抗體型融合蛋白（即抗體酶， abeneyme） 在藥物治療中應(yīng)用前景廣闊，它可在靶向位置上將前體藥物轉(zhuǎn)化成有效的藥物，避免對(duì)正常組織的傷害，此法稱為抗體介導(dǎo)的酶前體藥物治療。 五、抗體融合蛋白 ? 構(gòu)建抗體融合蛋白的原則是：將第一個(gè)蛋白的終止密碼子刪除，再接上帶有終止密碼子的第二個(gè)蛋白基因，即可實(shí)現(xiàn)兩個(gè)基因共表達(dá)。在抗體的 N端和 C端融合其它蛋白都可以獲得成功。關(guān)鍵是兩個(gè)蛋白間的接頭序列 linker， 一般說來3~5個(gè)氨基酸就可滿足大部分融合蛋白的正確折疊的要求。如加入一段有疏水性和一定伸展性的長(zhǎng)鏈，可緩解兩種蛋白的相互干擾。 第四節(jié) 基因工程抗體和抗體工程 ? 一、噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)的基本方法 ? 獲得目的基因 ? 抗體庫(kù)技術(shù)的載體：現(xiàn)在普遍使用噬菌粒（ phagemid） 載體，其中的 pHEN1為新一代載體，轉(zhuǎn)化效率高，有利于提高庫(kù)容量。 ? 淘篩：抗原固定化后，對(duì)噬菌粒群的吸附、洗滌和洗脫后再感染擴(kuò)增，與輔助噬菌體超感染獲得大容量次級(jí)文庫(kù)，再反復(fù)與抗原吸附，經(jīng)幾輪淘篩后，淘汰了非目的克隆，且使目的克隆大量擴(kuò)增。 ? 四、表達(dá)與鑒定：目的克隆經(jīng)過鑒定后，再導(dǎo)入感受態(tài)菌株，進(jìn)行可溶性表達(dá)，其產(chǎn)物用 western blot分析確定后，就完成了全過程。 二、噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)的特點(diǎn) ? 模擬天然全套抗體庫(kù) ? 抗體文庫(kù) ?1011庫(kù)容，能包含 B細(xì)胞全部克隆。建庫(kù)的外源基因來自人外周血、骨髓或脾臟的淋巴細(xì)胞提取的 mRNA反轉(zhuǎn)錄形成的 cDNA擴(kuò)增，使用的通用引物采自多個(gè)人體，具有人的種屬普遍性。 VH和 VL隨機(jī)重組增加抗體的多樣性。 ? 避開了人工免疫和雜交瘤技術(shù) ? 可獲得高親和力的人源化抗體 ? 在噬菌體抗體庫(kù)中， VH和 VL基因的隨機(jī)重組模擬了體內(nèi)抗體親和力成熟過程，所用抗體基因又都是來自人體，因此產(chǎn)生的抗體必然都是高親和力的。 三、基因工程抗體的表達(dá) ? 原核細(xì)胞表達(dá) ? 真核細(xì)胞表達(dá) ? 轉(zhuǎn)基因植物表達(dá) ? 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物表達(dá) 第五節(jié) 抗體診斷試劑 ? 一、血清學(xué)鑒定用的抗體類試劑 ? 鑒定病原菌的抗體試劑：診斷血清制備步驟：（ 1）制備細(xì)菌抗原， O（ 菌體）抗原， H（ 鞭毛）抗原；（ 2）免疫動(dòng)物和制備抗體血清 ? 乙型肝炎病毒表面抗原（ HBsAg） 的反向被動(dòng)血凝診斷試劑 ? 妊娠診斷試劑 ? 抗 ABO血型系統(tǒng)血清 二、免疫標(biāo)記技術(shù)用的抗體類試劑 ? 給抗體標(biāo)記放射性核素、熒光素或酶活性，能將抗原抗體反應(yīng)放大，使常規(guī)方法難以觀察或檢測(cè)的反應(yīng)得以顯現(xiàn)，因而大幅度提高抗原抗體反應(yīng)的敏感性，用于對(duì)微量抗原物質(zhì)進(jìn)行定性或定量檢測(cè)，結(jié)合顯微鏡或電子顯微鏡技術(shù)，還可對(duì)抗原物質(zhì)作出組織內(nèi)或細(xì)胞內(nèi)的定位測(cè)定。除用于臨床診斷外，還能為探討發(fā)病機(jī)制提供有力的研究手段。免疫標(biāo)記技術(shù)有三種基本類型：免疫熒光技術(shù)、免疫酶技術(shù)和放射免疫技術(shù) 二、免疫標(biāo)記技術(shù)用的抗體類試劑 ? 熒光抗體診斷試劑 ? 熒光色素如異硫氰酸熒光素（ FITC） 等標(biāo)記抗體球蛋白，即成為熒光抗體。用熒光抗體浸染含有抗原物質(zhì)的組織切片或細(xì)胞，熒光抗體與抗原集合，在熒光顯微鏡下成為可發(fā)光的可視物，從而達(dá)到診斷或定位的目的。 ? （ 1）熒光抗體的制備 ? （ 2）免疫熒光測(cè)定法有直接和間接兩種方法。 二、免疫標(biāo)記技術(shù)用的抗體類試劑 ? 免疫酶抗體診斷試劑 ? 免疫酶技術(shù)是用酶標(biāo)記抗體來檢測(cè)抗原的方法，本法分為免疫酶染色（組化法）和酶免疫測(cè)定（ EIA） 兩種類型。 ? （ 1）免疫酶染色法用抗體診斷試劑：常用的酶為 HRP， 其底物為二氨基聯(lián)苯胺（ DAB）， 兩者作用可生成棕褐色沉淀物質(zhì)，使抗原呈色。 ? （ 2）酶免疫測(cè)定用抗體診斷試劑：見書中介紹的幾種試劑，重點(diǎn)掌握酶免疫法的基本概念。比如 ELISA方法（夾心法、間接法）。 ? 放射免疫用抗體診斷試劑 三、導(dǎo)向診斷藥物 ? 放射免疫顯像定位技術(shù) 第六節(jié) 抗體治療藥物 ? 一、放射性核素標(biāo)記的抗體治療藥物 ? 二、抗癌藥物偶聯(lián)的抗體藥物 ? 三、毒素偶聯(lián)的抗體藥物
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1