基礎(chǔ)生物技術(shù)ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-05-03 22:03本頁(yè)面
【正文】 通常為 GCrich 小衛(wèi)星基因 (minisatellites) ? 小衛(wèi)星基因 (minisatellites)序列的特性為在兩個(gè)內(nèi)切酶切位間具有縱向重復(fù)排列的 DNA序列 ? GGATGGATGGATGGATGGAT ? 每一串序列中重復(fù)的次數(shù)約為 2100，此種重復(fù)的核苷酸部分稱為 『 變異數(shù)串連重復(fù)序列 』 ? 一基因座重復(fù)區(qū)域是多變性的 (~10%)，為多型性區(qū)域 ? 許多家族之對(duì)偶基因皆有 VNTR對(duì)偶基因， VNTR之雜異性是普遍的 變異數(shù)串連重復(fù)序列 (Variable Number Tandem Repeats。 VNTRs) ? 應(yīng)用 RFLP技術(shù)，核酸內(nèi)切酶是可以辨識(shí) VNTRs兩側(cè)序列，再以電泳及南方墨點(diǎn)法之 RFLP標(biāo)準(zhǔn)操作流程可呈現(xiàn)不同樣品 VNTRs之差異 ? 由于同一個(gè)體的任何組織中所得之 DNA具 VNTRs類型是相同的，此分析法只需要少量的樣本即可 以 PCR擴(kuò)增 DNA文件 (PCRbased DNA profiling) ? 目前 DNA文件采用 PCR與短縱排重復(fù)序列 (short tandem repeats, STRs)， STRs為短 (24)VNTRs，STR位置較 VNTRs具有較少的對(duì)偶基因 ? 1999年美國(guó)使用 10個(gè) STR基因座，保證 10億個(gè)體中有少于一個(gè)具有相同的結(jié)果 ? FBI目前使用 13個(gè) STR基因座位置來(lái)提高其樣本有相同 DNA文件的概率 利用 RFLP(restriction fragment length polymorphism)與 PCR的 DNA文件 ? RFLP為 DNA文件利用自然發(fā)生具有高度差異性(每個(gè)基因座上有許多對(duì)偶基因 )的 VNTRs，因此兩個(gè)不相關(guān)個(gè)體具有相同 DNA文件是非常不可能的 ? 此技術(shù)的缺點(diǎn)為需要相當(dāng)質(zhì)量的 DNA及電泳時(shí)所造成不同的結(jié)果判讀，如斑轉(zhuǎn)移 (bandshifting)為相同的片段于膠片上遷移的距離不同，因此需要藉助其它方法來(lái)確認(rèn) (單型探針 monomorphic probe) 利用 RFLP與 PCR (polymerase chain reaction)的 DNA文件 ? 以 PCR為基礎(chǔ)的 DNA文件為快速且省錢(qián)的技術(shù)，但準(zhǔn)確度較低 ? PCR只須少量的樣本，但是也因此可能造成增幅過(guò)程中引起的對(duì)偶基因中斷 (allele dropout) ? 當(dāng) DNA樣本過(guò)度分解的狀況之下，只能選擇以STR分析 ? PCR是非常靈敏的技術(shù)，而在污染物中所存在的微量未知成分可能會(huì)阻礙增幅的程序 DNA文件結(jié)果解釋的陷阱 ? 實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)的過(guò)程當(dāng)中， DNA文件的解釋可能因?yàn)椴僮魃匣蚪庾x上的差異而發(fā)生錯(cuò)誤 ? 若嫌疑犯與受難者的文件未能符合可能可以排除涉案人；但確定的比對(duì)未必可以證明嫌疑犯是犯罪的犯人，可能有其他具相同 DNA文件的人 ? DNA文件一般用到的范圍是父子關(guān)系的爭(zhēng)議或是血緣關(guān)系的分析 DNA文件的應(yīng)用 ? DNA文件在同一家族中 ,每一個(gè)基因座上對(duì)偶基因相同的可能性為 25%。 若采用 4個(gè)基因座 ,兩個(gè)家屬具相同對(duì)偶基因的可能性至少 %, 因此可以用來(lái)鑒別相同家族不同成員的案情 ? 粒線體 DNA也可以當(dāng)作 DNA文件，其由母系遺傳而來(lái)，兩個(gè)體是否有關(guān)聯(lián)，可通過(guò)母親的血緣而得到 mtDNA序列相似度加以分辨
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