環(huán)境生物技術(shù)ppt課件-閱讀頁
2025-05-16 12:13本頁面
【正文】 度群落級毒性試驗。 美國 Ames教授 1975年正式建立的方法 第二節(jié) 污染物致突變性的微生物檢測方法 正向突變 回復(fù)突變 試驗菌株： ? 曾推薦的 5株： TA153 TA153 TA153 TA9TA100 ? 83年修訂之后： TA9 TA9 TA100、 TA102 賦予其他附加突變： uvrB突變：失去 DNA切割修復(fù)能力，敏感性增加； rfa突變：脂多糖屏障卻失，大分子透入； 組入某些質(zhì)粒提高回變能力。 每次試驗可使用一種或幾種菌株，只要有任何一株發(fā)生大量的回復(fù)突變，即為陽性結(jié)果。 ? 哺乳動物微粒體酶系統(tǒng)（簡稱 S9混合液）：從肝勻漿中制?。? ? 加入 S9混合液使體外測試條件更接近于人體內(nèi)代謝條件。 長出密集菌落的為陽性，只長出少量散在菌落的為陰性。 應(yīng)用與評價 ? 175種已知致癌物進行試驗，發(fā)現(xiàn) 157種為陽性，陽性吻合率 90%；陰性吻合率 87%。 ? 已被我國食品安全毒理學(xué)評價程序、農(nóng)藥登記毒理學(xué)試驗方法、新藥毒理學(xué)研究指導(dǎo)原則、化妝品安全性評價程序和方法等列為評價致突變性的必做試驗。 ? 菌株：蝠魚發(fā)光桿菌的暗變異菌株 SD18和 RC9費氏弧菌的暗變異株 Pf1明亮發(fā)光桿菌 T3小種的暗變異株 T9171。 C、）、 24h后開始測發(fā)光強度，以后每隔 34天測定一次。 （二）發(fā)光細菌試驗 （一） SOS顯色試驗 ? SOS修復(fù)是指 DNA受到嚴重損傷、細胞處于危急狀態(tài)時所誘導(dǎo)的一種 DNA修復(fù) 方式，修復(fù)結(jié)果只是能維持基因組的完整性，提高細胞的生存率，但留下的錯誤較多，故又稱為錯誤傾向修復(fù)（ errorprone repair），使細胞有較高的突變率。 ? 定性試驗： Xgal培養(yǎng)基平板，紙片點試 ,出現(xiàn)藍色色素即為陽性。 C,2h ,加入 β – ONPG顯色一定程度，終止反應(yīng)， 420nm處測吸光度。 ? 應(yīng)用評價：敏感性與準(zhǔn)確性與 Ames試驗相當(dāng)，某些方面優(yōu)于后者，可以相互補充。 P3478(polA),對照為野生型菌株 W3110(polA+)。 ? 對直接突變作用的烷化劑較為敏感，對需要代謝活化的化合物不敏感。 枯草芽孢桿菌 H17(recA+）對照，全線生長 枯草芽孢桿菌 M45(recA）試驗，抑菌現(xiàn)象 （四）溶源性細菌試驗 原理：原噬菌體 誘變劑 烈性噬菌體（噬菌體誘導(dǎo)現(xiàn)象） → 裂解非溶源性細菌（作為指示菌） → 固體培養(yǎng)基上出現(xiàn)噬菌斑 菌株： (λ )—— 溶源性 (S)—— 指示菌 方法：同時將兩菌株接種于一個培養(yǎng)基平板上，加入受試物，經(jīng)一夜培養(yǎng)，觀察噬菌斑。 —— 致癌可能性 ? 需要一組試驗配套進行檢測，包含 5種遺傳學(xué)終點試驗：ＤＮＡ完整性的改變，重排或交換，堿基序列改變（突變），染色體畸變，染色體分離改變。
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