【正文】 脈硬化性癡呆、靜注用于刺激造血和促進(jìn)白細(xì)胞生成、治療慢性肝炎、肝硬化和初期癌癥；輔酶 A 用于動脈硬化、白細(xì)胞、血小板減少，肝、腎病等； ATP：用于心力衰竭、心肌炎、心肌梗死、腦動脈和冠狀動脈硬化、急性脊髓灰質(zhì)炎、肌肉萎縮、慢性肝炎等。 試述微生物的生物轉(zhuǎn)化及其特點 答案要點： 微生物的生物轉(zhuǎn)化是指微生物對有機化合物某一特定部位（基團）的作用，使它轉(zhuǎn)變成結(jié)構(gòu)上相類似的另一種化合物。轉(zhuǎn)化的產(chǎn)物不是由營養(yǎng)物質(zhì)經(jīng)微 生物細(xì)胞的一系列代謝過程后產(chǎn)生的，而是利用微生物細(xì)胞的酶系對底物某一特定部位進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)形成的。 生物轉(zhuǎn)化的特點：專一性，底物及產(chǎn)物空間結(jié)構(gòu)專一；產(chǎn)量高，一個酶促反應(yīng)可代替幾個化學(xué)反應(yīng)，收率高；反應(yīng)條件溫和，常溫常壓，可改善工人勞動條件，避免減少使用強酸、強堿或有毒物質(zhì)；可進(jìn)行化學(xué)法難以進(jìn)行的反應(yīng)。 基因工程技術(shù)生產(chǎn)藥物的優(yōu)點是什么？ 答案要點： 大量生產(chǎn)過去難以獲得的生理活性蛋白和多肽，為臨床使用提供有效的保障； 可以提供足夠數(shù)量的生理活性物質(zhì)，以便對其生理、生化和結(jié)構(gòu)進(jìn)行深入的研究，從而擴大這些 物質(zhì)的應(yīng)用范圍； 可以發(fā)現(xiàn)、挖掘更多的內(nèi)源性生理活性物質(zhì)； 內(nèi)源生理活性物質(zhì)在作為藥物使用時存在的不足之處，可通過基因工程和蛋白質(zhì)工程進(jìn)行改造和去除；可獲得新型化合物，擴大藥物篩選來源。 基因工程藥物生產(chǎn)的基本過程是什么？ 答案要點：基因工程技術(shù)就是將重組對象的目的基因插入載體，拼接后轉(zhuǎn)入新的宿主細(xì)胞，構(gòu)建成工程菌，實現(xiàn)遺傳物質(zhì)的重新組合，并使目的基因在工程菌內(nèi)進(jìn)行復(fù)制和表達(dá)的技術(shù)。 基因工程藥物制造的主要程序是：目的基因的克??；構(gòu)建 DNA 重組體；將 DNA 重組體轉(zhuǎn)入宿主菌構(gòu)建工程菌；工程菌的發(fā) 酵；外源基因表達(dá)產(chǎn)物的分離純化；產(chǎn)品的檢驗等。 通常將基因工程藥物的生產(chǎn)分為上游和下游技術(shù)。上游階段是研究開發(fā)必不可少的基礎(chǔ)，它主要是分離目的基因，構(gòu)建工程菌，主要在實驗室完成。下游階段是從工程菌的大規(guī)模培養(yǎng)到產(chǎn)品的分離純化、質(zhì)量控制，該階段是將實驗室成果產(chǎn)業(yè)化、商品化。 11 克隆真核基因常用的方法有哪幾種？ 答案要點：克隆真核基因常用的方法有 逆轉(zhuǎn)錄法 和 化學(xué)合成法 。 一、逆轉(zhuǎn)錄法 逆轉(zhuǎn)錄法就是先分離純化目的基因的 mRNA，再反轉(zhuǎn)錄成互補 DNA，然后進(jìn)行互補 DNA 的克隆表達(dá)。從產(chǎn)生該蛋白質(zhì)的真核細(xì)胞中提取 mRNA，以其為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，反轉(zhuǎn)錄合成該蛋白質(zhì) mRNA 的互補 DNA，再以互補 DNA 為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶或 DNA 聚合酶作用下，最終合成編碼該蛋白質(zhì)的雙鏈 DNA 序列，該序列不含內(nèi)含子。 mRNA 的純化 細(xì)胞內(nèi)含有三種 RNA， mRNA 占 RNA 總量的 2%5%，相對分子量大小不一致，分離也有很大的困難，但是 mRNA 的 3’末端常含有一多聚腺苷酸組成的末端，長達(dá) 20250 個腺苷酸，足以吸附于寡聚胸苷酸 纖維素上，從而可以用親和層析法將mRNA 從細(xì)胞總 RNA 上分離出來，可得到純度較高的 mRNA。 互 補 DNA 第一鏈的合成 mRNA 的 3’末端常含有一多聚腺苷酸序列，可用寡聚脫氧胸苷酸為引物，在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化下，開始互補 DNA 的合成。在合成反應(yīng)體系中加入一種放射性標(biāo)記的 dNTP，在反應(yīng)中以及反應(yīng)后可通過測定放射性標(biāo)記的 dNTP 摻入量，計算出互補DNA 的合成效率，在凝膠電泳后，進(jìn)行放射自顯影分析產(chǎn)物的分子大小，探索最佳反應(yīng)條件。 互補 DNA 第二條鏈的合成 先用堿解或核酸酶酶解的方法除去互補 DNAmRNA 雜交鏈中的 mRNA 鏈，然后以互補 DNA 第一鏈為模板合成第二鏈，并用核酸酶 S1 專一性切除單鏈 DNA。 互補 DNA 克隆 載體有兩種質(zhì)粒和噬菌體，根據(jù)重組后插入的互補 DNA 是否能夠表達(dá)、能否經(jīng)轉(zhuǎn)錄和翻譯合成蛋白質(zhì)，又將載體分為表達(dá)型載體和非表達(dá)型載體?；パa DNA 插入片段小于 10 千堿基對，可選用質(zhì)粒載體，如大于 10 千堿基對則選用噬菌體作為載體。 二、化學(xué)合成法 較小的蛋白質(zhì)或多肽的編碼基因可以采用人工化學(xué)合成法合成，其先決條件是已知目的基因的核苷酸序列，或已知蛋白質(zhì)的氨基酸序列，按相應(yīng)的密碼子推導(dǎo)出 DNA 的堿基序列。用化學(xué)方法合成目的基因不同部位的兩條鏈的寡核苷酸短片段，再退火成為兩端形成粘末端的 DNA 雙鏈片 段，然后將這些雙鏈片段按正確的次序進(jìn)行退火使連接成較長的 DNA 片段，再用連接酶連接成完整的基因。 人工化學(xué)合成的限制： 不能合成太長的基因， 5060個堿基對； 人工合成堿基對時，遺傳密碼的簡并會為選擇密碼子帶來很大的困難； 費用較高。 1 固固 定定 化化 酶酶 及及 固固 定定 化化 酶酶 的的 特特 點點 ：： 酶酶 類類 可可 粗粗 分分 為為 天天 然然 酶酶 和和 修修 飾飾 酶酶 ， 固固 定定 化化 酶酶 屬屬 于于 修修 飾飾 酶酶 ， 修修 飾飾 酶酶 類類 還還 包包 括括 經(jīng)經(jīng) 過過 化化 學(xué)學(xué) 修修 飾飾 的的酶酶 和和 用用 分分 子子 生生 物物 學(xué)學(xué) 方方 法法 在在 分分 子子 水水 平平 上上 進(jìn)進(jìn) 行行 改改 良良 的的 酶酶 等等 。 固固 定定 化化 酶酶 最最 大大 特特 點點 是是 既既 具具 有有 生生 物物 催催 化化 劑劑 的的 功功 能能 ， 又又 具具 有有 固固 相相 催催 化化 劑劑的的 特特 性性 。 固固 相相 酶酶 還還 具具 有有 以以 下下 優(yōu)優(yōu) 點點 ：： ①① 可可 多多 次次 使使 用用 ， 而而 且且 在在 多多 數(shù)數(shù) 情情 況況 下下 ， 酶酶 的的 穩(wěn)穩(wěn) 定定 性性 提提 高高 。 如如 固固 定定 化化 的的 葡葡 萄萄 糖糖 異異 構(gòu)構(gòu) 酶酶 可可 以以 在在60~65℃℃ 條條 件件 下下 連連 續(xù)續(xù) 使使 用用 超超 過過 1000h；； ②② 反反 應(yīng)應(yīng) 后后 ， 酶酶 與與 底底 物物 和和 產(chǎn)產(chǎn) 物物 易易 于于 分分 開開 ， 產(chǎn)產(chǎn) 物物 中中 無無 殘殘 留留 酶酶 ， 易易 于于 純純 化化 ， 產(chǎn)產(chǎn) 品品 質(zhì)質(zhì) 量量 高高 ；； ③③反反 應(yīng)應(yīng) 條條 件件 易易 于于 控控 制制 ， 可可 實實 現(xiàn)現(xiàn) 轉(zhuǎn)轉(zhuǎn) 化化 反反 應(yīng)應(yīng) 的的 連連 續(xù)續(xù) 化化 和和 自自 動動 控控 制制 ；； ④④ 酶酶 的的 利利 用用 效效 率率 高高 ， 單單 位位 酶酶 催催 化化 的的 底底 物物 量量 增增 加加 ， 用用 酶酶 量量 減減 少少 ；；⑤⑤ 比比 水水 溶溶 性性 酶酶 更更 適適 合合 于于 多多 酶酶 反反 應(yīng)應(yīng) 。 1 酶 反應(yīng)器 操作條件及應(yīng)用的注意事項 反應(yīng)器 操作條件的確 酶操作條件底物濃度 、 酶濃度 、 溫度 、 PH、 反應(yīng)液的混合與流動 . 注意事項酶 保持酶 反應(yīng)器 操作的穩(wěn)定性 保持 反應(yīng)器 中流體的 流動方式和狀態(tài) 防止酶的變性失活 防止微生物的污染 1 兩兩 相相 法法 培培 養(yǎng)養(yǎng) 系系 統(tǒng)統(tǒng) 必必 須須 滿滿 足足 如如 下下 條條 件件 ：： ①① 添添 加加 的的 固固 相相 （（ 如如 樹樹 脂脂 ）） 或或 液液 相相 對對 細(xì)細(xì) 胞胞 無無 毒毒 害害 作作 用用 ， 不不 影影 響響 細(xì)細(xì) 胞胞 生生 長長 和和 產(chǎn)產(chǎn) 物物 的的 合合 成成 ；； ②② 產(chǎn)產(chǎn) 物物 易易 被被 固固 相相 吸吸 附附 或或 被被 有有 機機 相相 溶溶 解解 ；； 12 ③③ 兩兩 相相 易易 分分 離離 ；； ④④ 如如 為為 固固 相相 ， 不不 可可 吸吸 附附 培培 養(yǎng)養(yǎng) 基基 中中 的的 添添 加加 成成 分分 ， 如如 植植 物物 生生 長長 調(diào)調(diào) 節(jié)節(jié) 劑劑 、 有有 機機 成成 分分 等等 。 1 體體 外外 培培 養(yǎng)養(yǎng) 細(xì)細(xì) 胞胞 培培 養(yǎng)養(yǎng) 的的 基基 本本 條條 件件 ：： （（ 1）） 絕絕 對對 無無 菌菌 操操 作作 ；； （（ 2）） 足足 夠夠 的的 營營 養(yǎng)養(yǎng) 供供 應(yīng)應(yīng) ， 排排 除除 有有 害害 物物 質(zhì)質(zhì) 包包 括括 極極 其其 微微 量量 的的 離離 子子 摻摻 入入 ；； （（ 3）） 適適 量量 氧氧 氣氣 供供