林業(yè)生物技術(shù)復(fù)習(xí)資料-資料下載頁
2025-08-04 17:25本頁面
【正文】 的檢測，即轉(zhuǎn)錄水平上對特異mRNA的檢測和在翻譯水平上對特異蛋白質(zhì)的檢測；③外源基因表達蛋白的檢測，蛋白質(zhì)印跡法可檢測目的基因在翻譯水平的表達結(jié)果，能直接顯示目的基因在轉(zhuǎn)化水平中是夠經(jīng)過轉(zhuǎn)錄、翻譯最終合成特異的蛋白質(zhì)，從而影響植株的性狀表現(xiàn)。1 轉(zhuǎn)基因植物是否安全：轉(zhuǎn)基因植物是通過基因轉(zhuǎn)移技術(shù)獲得的整合有外源基因的植物個體。在目前看來，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上具有很大的貢獻，可以增加農(nóng)作物產(chǎn)量，降低生產(chǎn)成本，減少化學(xué)農(nóng)藥對環(huán)境的污染，改善農(nóng)作物品質(zhì)并提高經(jīng)濟效益，但另一方面，其安全性也值得深思。轉(zhuǎn)基因植物的安全分兩方面，一個是環(huán)境安全性，一個是食品安全性。我覺得轉(zhuǎn)基因植物大規(guī)模放到環(huán)境中，有可能經(jīng)基因漂移、自然選擇和人為因素，造成生長失控，危害其他生物、物種異化和生態(tài)失衡等后果。食品安全方面，外來基因產(chǎn)生的新的蛋白可能會帶來過敏性和毒性，其標(biāo)記基因的抗生素可能在有機體內(nèi)導(dǎo)致對抗生素的抗性，由于人體內(nèi)生物化學(xué)變化的復(fù)雜性，轉(zhuǎn)基因植物作為食品對人體潛在危害或許要經(jīng)過很長的時間才能表現(xiàn)和監(jiān)測出來。但總體上講。目前為止，轉(zhuǎn)基因植物在食品方面并未發(fā)生任何事故。1 轉(zhuǎn)錄水平上的基因克隆方法：差別雜交篩選；扣除雜交代表性差別分析；差異顯示；cDNA陣列雜交；基因表達系列分析；抑制差減雜交。16’差別雜交篩選：適用于分離經(jīng)特殊處理而被誘發(fā)表達的mRNA的cDNA克隆。從本質(zhì)上講，差別雜交也屬于核酸雜交的范疇。差別雜交的技術(shù)基礎(chǔ)十分簡單，它不需要任何有關(guān)的目的基因的核酸序列信息，而重要的是要擁有兩種不同的細(xì)胞群體：在一個細(xì)胞群體中目的基因正常表達，另一個細(xì)胞群體中目的基因不表達。在這種情況下便可制備到兩種不同的mRNA提取物。當(dāng)使用存在目的基因的mRNA探針時，所有包含重組體的菌落都呈陽性反應(yīng)，在X光底片上呈現(xiàn)黑色斑點，而使用不存在目的基因的mRNA探針時，除了含有目的基因的菌落外，其余的所有菌落都呈陽性反應(yīng)，在X光底片上呈現(xiàn)黑色斑點。比較這兩種底片對照原平板，便可以挑選出含目的基因的菌落。1 蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)：指多肽鏈借助氫鍵排列自己特有的a螺旋和b折疊片斷。α螺旋是蛋白質(zhì)中常見的一種二級結(jié)構(gòu)，肽鏈主鏈繞假想的中心軸盤繞成螺旋狀，一般都是右手螺旋結(jié)構(gòu)，螺旋是靠鏈內(nèi)氫鍵維持的。β折疊是由伸展的多肽鏈組成的。折疊片的構(gòu)象是通過一個肽鍵的羰基氧和位于同一個肽鏈或相鄰肽鏈的另一個酰胺氫之間形成的氫鍵維持的。β轉(zhuǎn)角是多肽鏈中常見的二級結(jié)構(gòu)，連接蛋白質(zhì)分子中的二級結(jié)構(gòu)，使肽鏈走向改變的一種非重復(fù)多肽區(qū)，一般含有2～16個氨基酸殘基1 DNA重組連接的方法大致分為四種：黏性末端連接，平末端連接，同聚物接尾連接，人工接頭連接。其中黏性末端連接法是最常用的連接方法，具有實驗操作簡單，易于回收外源DNA片段的優(yōu)點，而不足之處：（1）載體易自身環(huán)化；（2）用同一種限制酶產(chǎn)生的黏性末端連接不易定向克隆；（3）難插入特定的基因；（4）大片段DNA的重組率較低，即使用堿性磷酸酶處理了載體，載體也有成環(huán)的傾向；（5）用這種方法產(chǎn)生的重組體往往含有不止一個外源片段或不止一個載體連接起來的串聯(lián)重組體，增加篩選工作的困難。1 什么是乳腺生物反應(yīng)器及其作用：乳腺生物反應(yīng)器是指將有益的外源目的基因置于動物乳腺的特異性啟動子下轉(zhuǎn)入動物細(xì)胞獲得轉(zhuǎn)基因動物，利用轉(zhuǎn)基因動物乳腺作為反應(yīng)器，生產(chǎn)分泌目的基因產(chǎn)物。特點:生產(chǎn)的蛋白活性高、成本低、無污染。其主要應(yīng)用：是生產(chǎn)昂貴的藥用蛋白
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