【正文】 KaRa Code D312 基因組 DNA去除試劑： DNase I(RNase Free) TaKaRa Code D2215 相對(duì)定量應(yīng)用實(shí)例 分析小鼠某目的基因藥物處理不同時(shí)間點(diǎn)表達(dá)量變化 生物秀 — 專心做生物！ 構(gòu)建 RNA標(biāo)準(zhǔn)品電泳照片 M GAPDH X基因 TaKaRa in Vitro Transcription T7 Kit (TaKaRa Code D6140) 相對(duì)定量應(yīng)用實(shí)例 分析小鼠某目的基因藥物處理不同時(shí)間點(diǎn)表達(dá)量變化 生物秀 — 專心做生物！ 目的基因標(biāo)準(zhǔn)曲線制作結(jié)果 擴(kuò)增曲線圖 融解曲線圖 標(biāo)準(zhǔn)曲線圖 管家基因標(biāo)準(zhǔn)曲線制作結(jié)果 相對(duì)定量應(yīng)用實(shí)例 分析小鼠某目的基因藥物處理不同時(shí)間點(diǎn)表達(dá)量變化 生物秀 — 專心做生物！ 樣品目的基因定量結(jié)果 擴(kuò)增曲線圖 融解曲線圖 樣品管家基因定量結(jié)果 相對(duì)定量應(yīng)用實(shí)例 分析小鼠某目的基因藥物處理不同時(shí)間點(diǎn)表達(dá)量變化 目的基因 X 管家基因 H 已知量 Ct 定量結(jié)果 已知量 Ct 定量結(jié)果 標(biāo)準(zhǔn)品 1 10 1 標(biāo)準(zhǔn)品 2 100 10 標(biāo)準(zhǔn)品 3 1000 100 標(biāo)準(zhǔn)品 3 10000 1000 標(biāo)準(zhǔn)品 5 100000 10000 Sample1(空白） 353 41300 360 39500 Sample2(空白 ) 329 43800 305 41800 Sample3(3hr) 373 40900 393 38900 Sample4(3hr) 384 42700 396 43100 Sample5(6hr) 1670 44000 1600 45400 Sample6(6hr) 1570 38900 1570 38000 Sample7(9hr) 407 41600 328 40900 Sample8(9hr) 413 46700 419 43100 Sample9(12hr) 444 41600 474 41600 Sample10(12hr) 445 38900 471 38000 相對(duì)定量應(yīng)用實(shí)例 分析小鼠某目的基因藥物處理不同時(shí)間點(diǎn)表達(dá)量變化 生物秀 — 專心做生物！ 檢測(cè)樣品 管家基因 H 目的基因 X 定量結(jié)果平均值 定量結(jié)果平均值 校正值 相對(duì)量 Sample1(空白） 40400 1 Sample2(空白） 42800 317 Sample3(3hr） 39900 383 Sample4(3hr） 42900 390 Sample5(6hr） 44700 1635 Sample6(6hr） 38450 1570 Sample7(9hr） 44700 Sample8(9hr） 44900 416 Sample9(12hr） 41600 459 Sample10(12h） 38450 458 由以上結(jié)果顯示小鼠某基因經(jīng)藥物處理 6小時(shí)時(shí)表達(dá)量最高 小鼠某基因藥物處理不同時(shí)間點(diǎn)表達(dá)量圖表3210123管家基因 目的基因X相對(duì)表達(dá)量（Log2）對(duì)照樣品Sample 3（3hr）Sample 4（3hr）Sample 5（6hr）Sample 6（6hr）Sample 7（9hr）Sample 8（9hr）Sample 9（12hr）Sample 10（12hr）相對(duì)定量應(yīng)用實(shí)例 分析小鼠某目的基因藥物處理不同時(shí)間點(diǎn)表達(dá)量變化 生物秀 — 專心做生物！ Real Time PCR 基礎(chǔ)知識(shí) Real Time PCR 實(shí)驗(yàn)方法 Real Time PCR 解析方法 Real Time PCR 應(yīng)用實(shí)例 Real Time PCR 相關(guān)試劑與服務(wù) 主要內(nèi)容 生物秀 — 專心做生物！ Real Time PCR 相關(guān)試劑的選擇 試劑選擇的要素 TaKaRa Perfect Real Time相關(guān)試劑在各種儀器上的適用性 TaKaRa Perfect Real Time相關(guān)試劑與其它公司同類產(chǎn)品的比較 TaKaRa Perfect Real Time相關(guān)系列產(chǎn)品特點(diǎn) TaKaRa Real Time相關(guān)試劑的選擇 生物秀 — 專心做生物！ ? 使用方便性 → 2 Premix type，無(wú)需反應(yīng)條件摸索 。 ? 高擴(kuò)增效率 → 可以檢測(cè)低拷貝 DNA模板 。 ? 高反應(yīng)特異性 → 可在寬廣范圍內(nèi)進(jìn)行準(zhǔn)確定量 。 ? 與 Real Time PCR檢測(cè)系統(tǒng)的匹配性 → 選擇適用于各種 Real Time PCR檢測(cè)系統(tǒng)的試劑 。 ? 價(jià)格因素 → 降低實(shí)驗(yàn)成本。 試劑選擇的要素 生物秀 — 專心做生物！ 定量范圍寬廣 擴(kuò)增效率高， 起峰時(shí)間早 低拷貝檢測(cè)清晰 反應(yīng)特異性高， 負(fù)對(duì)照擴(kuò)增穩(wěn)定 (無(wú)非特異性擴(kuò)增 ) 間隔距離均勻 信號(hào)強(qiáng)度高 試劑選擇的要素 生物秀 — 專心做生物！ 實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 以 λDNA （ 1fg、 10fg、 100fg、 1pg、 10pg、 100pg、 1ng） 為模板，進(jìn)行 300bp擴(kuò)增性能及擴(kuò)增特異性檢測(cè)。 試劑名稱 SYBR174。 Premix Ex TaqTM（ Perfect Real Time） Code No.： DRR041 TaKaRa Perfect Real Time相關(guān)試劑在各種儀器上的適用性 Smart Cycler Ⅱ ABI 7000 Light Cycler RotorGene 2022 使用儀器 生物秀 — 專心做生物！ 增幅效率 = 相關(guān)系數(shù) = (Standard Curve取 7點(diǎn)） 增幅效率 = 相關(guān)系數(shù) = (Standard Curve取 7點(diǎn)） 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 ABI PRISM 7000 Lightcycler Rotorgene 2022 Smart Cycler II () 增幅效率 = 相關(guān)系數(shù) = （ Stand curve取 7個(gè)點(diǎn)） 增幅效率 = 相關(guān)系數(shù) = (Standard Curve取 7點(diǎn)） TaKaRa Perfect Real Time相關(guān)試劑在各種儀器上的適用性 生物秀 — 專心做生物！ 試劑名稱 SYBR174。 Premix Ex TaqTM（ Perfect Real Time） TaKaRa CodeDRR041 以及 A、 B、 C、 D公司同類試劑 實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 以 λDNA （ 1fg、 10fg、 100fg、 1pg、 10pg、 100pg、 1ng）為模板， 進(jìn)行 300bp擴(kuò)增性能及擴(kuò)增特異性檢測(cè)。 使用儀器 ABI 7000 TaKaRa Perfect Real Time相關(guān)試劑與其它公司同類產(chǎn)品的比較 生物秀 — 專心做生物！ 在 ABI PRISM 7000上的比較 TaKaRa 公司 TaKaRa 公司 TaKaRa 公司 A公司 A公司 A公司 C公司 C公司 增幅效率 = 相關(guān)系數(shù) = （ Standard Curve取 7點(diǎn)） 增幅效率 = 相關(guān)系數(shù) = （ Standard Curve取 7點(diǎn)） 增幅效率 = 相關(guān)系數(shù) = （ Standard Curve取 7點(diǎn)） C公司 TaKaRa ＞ C ＞ A TaKaRa Perfect Real Time相關(guān)試劑與其它公司同類產(chǎn)品的比較 進(jìn)行 Real Time PCR TaqMan Probe探針?lè)? Cycleave探針?lè)z測(cè) (CycleavePCR) 不需要優(yōu)化反應(yīng)體系 不需要優(yōu)化反應(yīng)體系 要組成獨(dú)特反應(yīng)體系 SYBR Premix Ex Taq (Perfect Real Time) (Code RR041A/B ) CycleavePCR Core Kit (Code CY501) TaKaRa Ex Taq RPCR (Code RR031A/B ) Premix Ex Taq (Perfect Real Time) (Code RR039A/B ) 進(jìn)行 Real Time RTPCR反應(yīng) SYBR Greenl法檢測(cè) TaqMan Probe探針?lè)? Cycleave探針?lè)z測(cè) (Cycleave RTPCR) SYBR Ex Script RTPCR Kit (Perfect Real Time) (Code RR053A ) Ex Script RTPCR Kit (Perfect Real Time) (Code RR051A ) Cycleave RTPCR Core Kit (Code CY502) One Step RTPCR One StepSYBR RTPCR Kit (Perfect Real Time) (Code RR046A/B ) One Step RTPCR Kit (Perfect Real Time) (Code RR044A/B ) 對(duì)使用 Perfect Real Time進(jìn)行 Real Time RTPCR的客戶 ,提供 primer合成服務(wù) 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋專用試劑 EASY Dilution (Code ) 探針?lè)z測(cè) SYBR Greenl法檢測(cè) 探針?lè)z測(cè) 生物秀 — 專心做生物！ TaKaRa Perfect Real Time相關(guān)系列產(chǎn)品特點(diǎn) 適合各種 Real Time PCR裝置 適合快速 Real Time PCR反應(yīng) 高性能的 PCR擴(kuò)增 寬廣范圍內(nèi)準(zhǔn)確定量 靈敏的低拷貝模板檢測(cè) ROX Reference Dye附帶 BSA添加 價(jià)格優(yōu)勢(shì) Real Time PCR 相關(guān)試劑的選擇 生物秀 — 專心做生物！ Real Time PCR用引物設(shè)計(jì)合成服務(wù) Real Time PCR檢測(cè)技術(shù)服務(wù) Real Time相關(guān)服務(wù) 生物秀 — 專心做生物！ 使用專用引物探針軟件， 免費(fèi)設(shè)計(jì)。 與 Perfect Real Time系列試劑配套使用效果最佳。不需要反應(yīng)條件檢討。 不易形成引物二聚體。 進(jìn)行 RNA引物設(shè)計(jì)時(shí)通常設(shè)計(jì)在 exon junction上，使用 genomic DNA的擴(kuò)增難以進(jìn)行。 引物序列不含有已知的 SNP位點(diǎn) (已在 dbSNP上登錄 ) 通過(guò)同源性檢索確認(rèn)了其特異性。 可根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模灾鬟x擇設(shè)計(jì)的區(qū)域，通常一個(gè)目的基因提供 13對(duì)引物。 TaKaRa設(shè)計(jì) Real Time PCR用引物探針特點(diǎn) 對(duì)登錄在 NCBI RefSeq上的 Mouse? Rat? Human的mRNA序列已全部設(shè)計(jì)完成 (SYBR法 ) Real Time PCR用引物設(shè)計(jì)合成服務(wù) 生物秀 — 專心做生物！ 內(nèi)含子大小 全序列中內(nèi)含子數(shù)目 點(diǎn)擊進(jìn)入 UCSC網(wǎng)站 內(nèi)含子大小 全序列中內(nèi)含子數(shù)目 點(diǎn)擊進(jìn)入 UCS 網(wǎng)站 引物詳細(xì)資料 Real Time PCR用引物設(shè)計(jì)合成服務(wù) 生物秀 — 專心做生物！ Real Time PCR檢測(cè)技術(shù)服務(wù) TaKaRa Real Time PCR檢測(cè)技術(shù)服務(wù)包括從引物探針設(shè)計(jì)合成到 Real Time PCR反應(yīng)性確認(rèn)以及樣品檢測(cè)、解析的全套服務(wù)。 技術(shù)不足 條件不足 技術(shù)、條件都不足 021－ 64127324 hello 時(shí)間因素 快速獲得 滿意實(shí)驗(yàn)結(jié)果 生物秀 — 專心做生物！ 客戶提供信息