定量pcr基本原理及方法-資料下載頁
2025-05-15 01:36本頁面
【正文】 LC Green 雙 Taqman探針法檢測野生型和突變型 在基因型分析中 ， 可采用兩種不同的 Taqman探針 （ 分別針對野生型和突變型 )， 即一個 突變型 探針以一種熒光素 （ Flr） 標記 ， 而 野生型 探針則用不同的熒光物 （ Tet） 標記 。 如果只有一種信號被擴增出來 ， 則樣本為對應(yīng)的基因型 （ 野生型或突變型 ） 的純合子；如二者都被有效地擴增出來 ， 則樣本為雜合型 。 ? 利用擴增信號的種類來分型 雜合型 野生型 突變型 FRET探針進行熔解曲線分析確定基因型 FRET探針與模板結(jié)合時 ， 因共振能量的傳遞而信號增強 ， 而當(dāng)在 Tm 值時 ，F(xiàn)RET探針與 PCR產(chǎn)物分開 ， 熒光信號減弱 。 通過實時捕捉到的 PCR產(chǎn)物在熔解過程中熒光信號的變化 ， 得到 PCR產(chǎn)物的熔解曲線 。 因為發(fā)生基因突變的 PCR產(chǎn)物有特定的 Tm 值 ， 通過測定探針與 PCR產(chǎn)物分開時的熔解溫度 Tm值 ， 就能確定樣品的基因型 。 ? 利用熔解曲線檢測基因突變 雜合型 野生型 突變型 利用內(nèi)摻式染料進行高分辨率熔解曲線 （ HRM） 分析基因型 HRM根據(jù)序列長度 、 GC含量和互補性分析樣品 ， 可精確到單堿基差異 。相比其它方法節(jié)約了探針和標記的費用 。 上圖：用內(nèi)摻式染料 （ 無探針 ） 區(qū)分 ACTIN3（ R577X） SNP基因型 （ C到 T替代 ） 。同源野生型 、 突變型及雜合樣品如圖所示 （ 10次重復(fù) ） ， 由隨機軟件自動分型 。 片段預(yù)先進行 40個循環(huán)的快速擴增 （ 40分鐘 ） 。 ? 利用熔解曲線檢測基因突變 謝謝 ！ 專才服務(wù)專家
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