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定量pcr基本原理及方法-在線瀏覽

2025-07-18 01:36本頁面
  

【正文】 值( threshold)的設(shè)定 PCR efficiency =[10(1/slope)]1 Where slope=1/m Slope 100%efficiency PCR循環(huán)在到達(dá) Ct值所在的循環(huán)數(shù)時 , 剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期 (對數(shù)期 ) , 此時微小誤差尚未放大, 因此 Ct值的重現(xiàn)性極好 , 即同一模板不同時間擴(kuò)增或同一時間不同管內(nèi)擴(kuò)增 , 得到的 Ct值是恒定的 。利用已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)未知樣品的 Ct值,即可計算出該樣品的起始拷貝數(shù)。 ( 自備標(biāo)準(zhǔn)品 , 檢測樣品做 3次重復(fù)復(fù)管 ) HouseKeeper Gene Gene of Interest ? 相對定量 利用溶解曲線進(jìn)行實驗條件的優(yōu)化( RG3000) ? 熔解曲線分析 deg.73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100dF/dT. 3 5.3. 2 5.2. 1 5.1. 0 5B i n AB i n BAnnealing at 60℃ deg.73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100dF/dT1 . 21 . 11.9.8.7.6.5.4.3.2.10B i n AAnnealing at 63℃ ? 標(biāo)記方法 ? Taqman 定量分析 , 基因型分析
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