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熒光定量pcr原理及應(yīng)用-資料下載頁(yè)

2025-01-16 06:17本頁(yè)面
  

【正文】 引物設(shè)計(jì)原則 ?引物最適長(zhǎng)度為 15~ 20bp. ?G+C含量為 40~ 60%。 ?引物的 Tm值應(yīng)相似,差異不超過(guò) 1~ 2℃ . ?產(chǎn)物長(zhǎng)度在 80~ 150bp. ?不能形成引物二聚體。 Taqman探針設(shè)計(jì)原則 ?長(zhǎng)度 3045bp,Tm比引物至少高 5℃ 。 ?盡量靠近上游引物。 ?5’端不要有 G, G會(huì)有淬滅作用,影響定量。 ?3’端必須封閉。 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR的應(yīng)用 目前 實(shí)時(shí)熒光 PCR 技術(shù)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)科學(xué)研究、臨床診斷、疾病研究及藥物研發(fā)等領(lǐng)域。其中最主要的應(yīng)用集中在以下幾個(gè)方面: 1. DNA 或 RNA 的絕對(duì)定量分析 :包括 病原微生物或病毒含量的檢測(cè) , 轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物轉(zhuǎn)基因拷貝數(shù)的檢測(cè), RNAi基因失活率的檢測(cè)等。 2. 基因表達(dá)差異分析 :例如比較 經(jīng)過(guò)不同處理樣本之間特定基因的表達(dá)差異 ( 如藥物處理、物理處理、化學(xué)處理等 ) ,特定基因在不同時(shí)相的表達(dá)差異以及 cDNA 芯片或差顯結(jié)果的確證 . 3. 基因分型 :例如 SNP 檢測(cè),甲基化檢測(cè)等。 ?
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