pcr技術(shù)的原理、操作及應(yīng)用-資料下載頁
2025-01-19 08:14本頁面
【正文】 增的指數(shù)期。 Realtime PCR的操作 3 ? 結(jié)果判定 ? 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn) ? 。 ? Ct值應(yīng)小于等于 。否則，此次實(shí)驗(yàn)視為無效。 ? 結(jié)果判斷 ? Ct值無數(shù)值的樣本為陰性樣本。 ? Ct值 ≤。 ? 。重做結(jié)果無數(shù)值者為陰性，否則為陽性。 PCR技術(shù)的應(yīng)用 ? 基因克隆、測序和表達(dá)等 ? 法醫(yī)學(xué)個體識別和親子鑒定 ? 遺傳性疾病檢測、腫瘤診斷、病原體檢測等 基因克隆和表達(dá) DNA指紋技術(shù) 1 ? 1984年英國的遺傳學(xué)家 Alec Jeffreys在進(jìn)行肌紅蛋白的 DNA序列研究時，意外發(fā)現(xiàn)非功能 DNA（不產(chǎn)生蛋白的 DNA）上重復(fù)著一種小片段 DNA，這一含 15個左右堿基的 DNA片段，在不同個體間重復(fù)的頻率及位置有明顯的不同， Jeffreys首先在自己的 DNA上進(jìn)行研究，驗(yàn)證了這一技術(shù)，如果我們有血緣關(guān)系，這些不同會大大縮小。 Jeffreys命名這一技術(shù)為 DNA指紋技術(shù)（ DNA finger print）。 DNA指紋技術(shù) 2 ? 采集血樣（毛發(fā)、精液、口腔粘膜細(xì)胞），分離 DNA，用 PCR將選定的 DNA片段放大，并進(jìn)行對比，統(tǒng)計(jì)分析，便可得出是否為作案兇手或是否有血緣關(guān)系。 分子診斷學(xué) ? 分子診斷學(xué)是以分子生物學(xué)理論為基礎(chǔ)，利用分子生物學(xué)的技術(shù)和方法研究人體內(nèi)源性或外源性生物大分子和大分子體系的存在、結(jié)構(gòu)或表達(dá)調(diào)控的變化，為疾病的預(yù)防、預(yù)測、診斷、治療和轉(zhuǎn)歸提供信息和決策依據(jù) 。 分子診斷學(xué)的發(fā)展階段 分子診斷學(xué)大致經(jīng)歷了 3個階段： ? （ 1）利用 DNA分子雜交技術(shù)進(jìn)行遺傳病的基因診斷； ? （ 2）以 PCR技術(shù)為基礎(chǔ)的 DNA診斷，特別是定量 PCR和實(shí)時 PCR的應(yīng)用，不僅可以檢測存在于宿主的多種 DNA和 RNA病原體載量，還可檢測多基因遺傳病細(xì)胞中mRNA的表達(dá)量 ? （ 3）以生物芯片（ biochip）技術(shù)為代表的高通量密集型檢測技術(shù)，生物芯片技術(shù)包括基因芯片，蛋白質(zhì)芯片，組織芯片等 。 分子診斷學(xué)的發(fā)展方向 分子診斷學(xué)的發(fā)展方向： ? （ 1）分子診斷的內(nèi)容從傳統(tǒng)的 DNA診斷發(fā)展到核酸及其表達(dá)產(chǎn)物（ mRNA、蛋白質(zhì)）的全面診斷； ? （ 2）分子診斷的策略從利用分子雜交、 PCR等單一技術(shù)的診斷發(fā)展到有機(jī)組合多項(xiàng)技術(shù)的聯(lián)合診斷； ? （ 3）分子診斷的方法從定性診斷發(fā)展到半定量和定量診斷，核酸標(biāo)記技術(shù)，特別是熒光標(biāo)記技術(shù)的發(fā)展，熒光定量 PCR技術(shù)等方法日益成熟； ? （ 4）分子診斷的范圍從單基因疾?。ㄩT德爾遺傳性疾病，諸如白血病、早老癥、血紅蛋白病、甲型肝炎病毒，人類免疫缺陷病毒，人乳頭瘤病毒等）的診斷發(fā)展到多基因?。[瘤、心腦血管疾病、代謝病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、自身免疫性疾病等）的診斷； ? （ 5）分子診斷的應(yīng)用多治療性診斷發(fā)展到預(yù)防性分析評價，特別是針對高危人群進(jìn)行疾病基因或疾病相關(guān)基因的篩查。
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