crisprcas9技術(shù)的原理及應(yīng)用-資料下載頁
2025-10-03 16:05本頁面
【導(dǎo)讀】片段的兩端還存在一段不太長的特有序列。CRISPR位點通常由短的高度保守的重復(fù)序列組成,重復(fù)序列。的長度通常21~48bp,重復(fù)序列之間被26~72bp間隔序列隔開。RNA引導(dǎo)下對靶位點進(jìn)行切割。它與Folk酶功能類似，但是它并不需。要形成二聚體才能發(fā)揮作用。NHEJ用于Cas9KO項目，HDR用于Cas9-CKO,KI項目。CRISPR-Cassystems》一文中，作者利用CRISPR-Cas系。根據(jù)修復(fù)方式不同，我們應(yīng)用TALEN及Cas9核酸內(nèi)切酶活性時進(jìn)行。兩者的區(qū)別，都是利用同源重組發(fā)生基因的定向插入，優(yōu)勢：機體。傳統(tǒng)KO，需要較長的同源臂，且打靶載體定的構(gòu)。建難度大，耗時長，既然同源重組效率高，同源臂降低也可發(fā)生高效重組,且多位點同時。以CKO為例，介紹結(jié)合Cas9發(fā)生KI,完成CKO模型。重組打靶，Cas9技術(shù)突破了打靶技術(shù)對物種的限制；規(guī)CKO、KI項目得到嵌合鼠時間多為8個月。不能完成的風(fēng)險。
【正文】 打靶載體 ?鑒定方案 ES打靶 ?藥物篩選 ?中靶鑒定 注射 ?囊胚注射 ?胚胎移植 繁育 ?繁育 ?建系 鑒定 ?基因型鑒定 ?突變檢測 胚胎冷凍 基因打靶小鼠制作流程 sgRNA篩選 囊胚打靶測試 注射 ?囊胚注射 ?胚胎移植 繁育 ?繁育 ?建系 鑒定 ?基因型鑒定 ?突變檢測 胚胎冷凍 mouth 3754 day ? Cas9技術(shù)進(jìn)行 CKO， KI的優(yōu)缺點 優(yōu)點： 1. 經(jīng)典同源重組局限在于需用胚胎干細(xì)胞（ Embryonic stem cell）進(jìn)行重組打靶， Cas9技術(shù)突破了打靶技術(shù)對物種的限制； 2. 采用 Cas9技術(shù)進(jìn)行模型動物制備，所需時間短，最快 37天，最慢 54天即可確定項目是否能夠進(jìn)行移植，得到 F0代鼠時間為 3個月；而常規(guī) CKO、 KI項目得到嵌合鼠時間多為 8個月。 缺點： 1. TALEN、 Cas9等進(jìn)行 CKO/KI技術(shù)目前仍處于 研發(fā) 測試階段，目前出現(xiàn)陽性鼠的項目比例為 5/25，故目前主推 Cas9CKO/KI可能出現(xiàn)項目不能完成的風(fēng)險。
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1