crisprcas9技術(shù)的原理及應(yīng)用-資料下載頁(yè)
2024-10-12 16:05本頁(yè)面
【導(dǎo)讀】片段的兩端還存在一段不太長(zhǎng)的特有序列。CRISPR位點(diǎn)通常由短的高度保守的重復(fù)序列組成,重復(fù)序列。的長(zhǎng)度通常21~48bp,重復(fù)序列之間被26~72bp間隔序列隔開(kāi)。RNA引導(dǎo)下對(duì)靶位點(diǎn)進(jìn)行切割。它與Folk酶功能類(lèi)似，但是它并不需。要形成二聚體才能發(fā)揮作用。NHEJ用于Cas9KO項(xiàng)目，HDR用于Cas9-CKO,KI項(xiàng)目。CRISPR-Cassystems》一文中，作者利用CRISPR-Cas系。根據(jù)修復(fù)方式不同，我們應(yīng)用TALEN及Cas9核酸內(nèi)切酶活性時(shí)進(jìn)行。兩者的區(qū)別，都是利用同源重組發(fā)生基因的定向插入，優(yōu)勢(shì)：機(jī)體。傳統(tǒng)KO，需要較長(zhǎng)的同源臂，且打靶載體定的構(gòu)。建難度大，耗時(shí)長(zhǎng)，既然同源重組效率高，同源臂降低也可發(fā)生高效重組,且多位點(diǎn)同時(shí)。以CKO為例，介紹結(jié)合Cas9發(fā)生KI,完成CKO模型。重組打靶，Cas9技術(shù)突破了打靶技術(shù)對(duì)物種的限制；規(guī)CKO、KI項(xiàng)目得到嵌合鼠時(shí)間多為8個(gè)月。不能完成的風(fēng)險(xiǎn)。
【正文】 打靶載體 ?鑒定方案 ES打靶 ?藥物篩選 ?中靶鑒定 注射 ?囊胚注射 ?胚胎移植 繁育 ?繁育 ?建系 鑒定 ?基因型鑒定 ?突變檢測(cè) 胚胎冷凍 基因打靶小鼠制作流程 sgRNA篩選 囊胚打靶測(cè)試 注射 ?囊胚注射 ?胚胎移植 繁育 ?繁育 ?建系 鑒定 ?基因型鑒定 ?突變檢測(cè) 胚胎冷凍 mouth 3754 day ? Cas9技術(shù)進(jìn)行 CKO， KI的優(yōu)缺點(diǎn) 優(yōu)點(diǎn)： 1. 經(jīng)典同源重組局限在于需用胚胎干細(xì)胞（ Embryonic stem cell）進(jìn)行重組打靶， Cas9技術(shù)突破了打靶技術(shù)對(duì)物種的限制； 2. 采用 Cas9技術(shù)進(jìn)行模型動(dòng)物制備，所需時(shí)間短，最快 37天，最慢 54天即可確定項(xiàng)目是否能夠進(jìn)行移植，得到 F0代鼠時(shí)間為 3個(gè)月；而常規(guī) CKO、 KI項(xiàng)目得到嵌合鼠時(shí)間多為 8個(gè)月。 缺點(diǎn)： 1. TALEN、 Cas9等進(jìn)行 CKO/KI技術(shù)目前仍處于 研發(fā) 測(cè)試階段，目前出現(xiàn)陽(yáng)性鼠的項(xiàng)目比例為 5/25，故目前主推 Cas9CKO/KI可能出現(xiàn)項(xiàng)目不能完成的風(fēng)險(xiǎn)。
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1