實驗十七、實時熒光pcr檢測沙門氏菌salmonellaspp-資料下載頁
2025-08-23 11:27本頁面
【導(dǎo)讀】學(xué)習(xí)采用實時熒光PCR儀檢測食品、化妝品。等中的沙門氏菌的特異檢測。試劑盒采用PCR方法結(jié)合熒光探針的體外擴(kuò)。UNG酶陽性對照陰性對照。嚴(yán)格按照無菌操作規(guī)程稱取25g樣品按國標(biāo)法進(jìn)行增菌。增菌樣品可暫存4℃冰箱，24小時內(nèi)檢驗。取待測樣本增菌液1ml加到，20℃?zhèn)溆靡源龣z測。設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為n（n=1管陰性對照+1管陽性。23ul，轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。解凍，以13,000rpm離心5min。陰、陽性對照使用前置室溫解凍，混勻。凍后取2ul加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋緊管蓋，對于多通道熒光PCR儀，熒光信號收集時設(shè)定。使用ABI系列熒光PCR檢測儀進(jìn)行結(jié)果分析時基線。因擴(kuò)增檢驗實驗室的管理規(guī)范執(zhí)行。物質(zhì)泄露污染儀器。并與其他廢棄物品一同滅菌后丟棄。封在專用塑料袋內(nèi)，丟棄于指定地點。氯酸鈉、75%酒精或紫外燈進(jìn)行消毒。
【正文】 效，可直接報告樣本陽性； ? 2. 檢測樣本 Ct值大于 40時，重復(fù)一次，如果 Ct值仍小于 40，且曲線有明顯的對數(shù)增長期，可報告樣本陽性，否則報告樣本陰性。 ? 3. 檢測不到樣本 Ct值時，報告樣本陰性。 七、試劑盒使用注意事項 ? 有關(guān)實驗室管理規(guī)范請嚴(yán)格按照行業(yè)行政主管部門頒布的有關(guān)基因擴(kuò)增檢驗實驗室的管理規(guī)范執(zhí)行。 ? 本試劑盒僅用于體外檢測，操作人員應(yīng)經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)并具有一定經(jīng)驗，開始檢測前請仔細(xì)閱讀本說明書全文。 ? 實驗請嚴(yán)格分區(qū)操作：第一區(qū)： PCR 前準(zhǔn)備區(qū) — 準(zhǔn)備擴(kuò)增所需試劑；第二區(qū)：樣本處理區(qū) — 待測樣本和對照品處理；第三區(qū)：檢測區(qū) — PCR 擴(kuò)增檢測。 ? 試劑盒內(nèi)各試劑使用前，充分融化后請稍事離心。反應(yīng)液分裝時應(yīng)盡量避免產(chǎn)生氣泡，上機(jī)前注意檢查各反應(yīng)管是否蓋緊，以免熒光物質(zhì)泄露污染儀器。 ? 各區(qū)物品均為專用，不得交叉使用，避免污染，實驗后即請清潔工作臺。實驗中用過的吸頭請直接打入盛有 1%次氯酸鈉的廢物缸內(nèi)，并與其他廢棄物品一同滅菌后丟棄。擴(kuò)增完畢立即取出反應(yīng)管，密封在專用塑料袋內(nèi)，丟棄于指定地點。工作臺及各物品定期用 1%次氯酸鈉、 75%酒精或紫外燈進(jìn)行消毒。 ? 儲存條件及有效期 :本試劑盒于 20℃ 保存，有效期為 6個月（請于有效期內(nèi)使用）。 八、思考題 ? 實時熒光 PCR檢測沙門氏菌的原理 ? ? 影響檢測準(zhǔn)確性主要有哪些因素？
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