熒光定量pcr-資料下載頁(yè)
2025-08-01 14:01本頁(yè)面
【正文】 防污染。擴(kuò)增和檢測(cè)可以在同一管內(nèi)檢測(cè)，不需要開蓋，不易污染；同時(shí)擴(kuò)增和檢測(cè)一步完成，不需要后期處理，不再需要擔(dān)心放射性污染。 （ 5）、速度快、高通量，可在 2－ 3小時(shí)完成 96個(gè)樣品的定量分析。 九、怎樣設(shè)計(jì)熒光定量 PCR實(shí)驗(yàn)方案 基因序列的查找 引物、探針的設(shè)計(jì) 熒光定量 PCR方法的確定 引物探針合成標(biāo)記 標(biāo)準(zhǔn)品的制備 反應(yīng)液的配制 反應(yīng)條件的設(shè)定 基數(shù)的設(shè)定、數(shù)據(jù)分析 引物設(shè)計(jì)通常遵守如下原則： A、引物與模板的序列要緊密互補(bǔ)。 B、引物與引物之間避免形成穩(wěn)定的二聚體或發(fā)夾 結(jié)構(gòu)。 C、引物不能在模板的非目的位點(diǎn)引發(fā) DNA 聚合反應(yīng)（即錯(cuò)配）。 D、引物長(zhǎng)度通常在 20－ 25bp， Tm值在 55－ 65℃ ，GC含量在 40%－ 60%，產(chǎn)物大小在 100250bp之間。 E、引物的 3’ 端避免使用堿基 A；引物 3’ 端避免出現(xiàn) 3 個(gè)以上連續(xù)相同的堿基。 F、為避免基因組的擴(kuò)增，引物設(shè)計(jì)最好能跨兩個(gè)外顯子。 探針設(shè)計(jì)通常遵守如下原則： A、探針位置盡可能地靠近上游引物。 B、探針長(zhǎng)度通常在 20－ 30bp， Tm值在 65－ 70℃ ，通常比引物高 5－ 10℃ ， GC含量在40%－ 70%。 C、探針的 5’ 端應(yīng)避免使用堿基 G。 D、整條探針中，堿基 C的含量要明顯高于 G的含量。 十、熒光定量 PCR 技術(shù)在科研中的應(yīng)用（朱捷等， 2022） （ 1） DNA 或 RNA 的定量檢測(cè)應(yīng)用 包括病原微生物或病毒含量的檢測(cè)，轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物轉(zhuǎn)基因拷貝數(shù)的檢測(cè)， RNAi 基因失活率的檢測(cè)等。實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)可以快速、準(zhǔn)確定量測(cè)出 （ 2）、基因表達(dá)研究的檢測(cè)應(yīng)用 熒光定量 PCR 技術(shù)對(duì) mRNA 水平的檢測(cè)比Northern 雜交、 RTPCR 等定量方法要方便、快速、準(zhǔn)確得多。熒光定量 PCR技術(shù)可以對(duì)不同組織、不同處理之間（如藥物處理、物理處理和化學(xué)處理等）、不同發(fā)育階段基因表達(dá)差異進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)各基因在組織細(xì)胞中的表達(dá)豐度， 分析基因的表達(dá)調(diào)控、 mRNA 的表達(dá)模式等研究。 （ 3）、食品安全中的檢測(cè)應(yīng)用 人們?cè)谌粘Ｉ钪惺称肥欠癜踩?，進(jìn)出口食品和糧食是否含有危險(xiǎn)或潛在危險(xiǎn)的成分，都可以用熒光定量 PCR 技術(shù)進(jìn)行快速檢測(cè) ,熒光定量 PCR 方法是國(guó)內(nèi)外進(jìn)行轉(zhuǎn)基因成分含量檢測(cè)的常用方法。例如， 利用 RQ PCR 技術(shù)定量檢測(cè)谷物基因來(lái)控制缺乏麥麩的嬰兒食物。 （ 4）、醫(yī)學(xué)及藥物開發(fā)中的檢測(cè)應(yīng)用 熒光定量 PCR 技術(shù)廣泛的應(yīng)用于臨床及其藥物方面，目前已經(jīng)在腫瘤研究，乙肝診斷，病毒檢測(cè)，動(dòng)物疾病檢測(cè)與防御，藥物療效的評(píng)價(jià)與考核等方面，為臨床理論研究、治療疾病和藥物開發(fā)提供了客觀的物質(zhì)基礎(chǔ)。 （ 5）、遺傳學(xué)及 SNPs 分析上的應(yīng)用 熒光定量 PCR 技術(shù)還可以用在點(diǎn)突變分析、等位基因分析、 DNA 甲基化檢測(cè)、單核苷酸多態(tài)性（ SNP）分析及特異突變基因檢測(cè)等。根據(jù)TaqMan 探針法在擴(kuò)增之前處理 DNA， 然后用特異的引物和探針可以區(qū)分甲基化和非甲基化的 DNA。SNP 分析從根本上來(lái)說(shuō)是確定一對(duì)染色體的每種基因的兩個(gè)拷貝，結(jié)合熒光定量 PCR 可以快速的檢測(cè) SNP 結(jié)果。 謝謝！
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