熒光定量pcr的原理及臨床應(yīng)用2學(xué)生講課hcmv-資料下載頁
2025-01-06 08:24本頁面
【正文】 吸取淋巴細胞懸液 人巨細胞病毒 DNA檢測試劑盒 ? 人巨細胞病毒 DNA的提?。馨图毎奶崛。? 淋巴細胞懸液 去除上清液，保留沉淀 12022rpm，5min 人巨細胞病毒 DNA定量檢測試劑盒 ? 人巨細胞病毒 DNA的提?。馨图毎奶崛。? 加入50μl DNA提取液 劇烈振蕩混勻 510s 100℃加熱10min 人巨細胞病毒 DNA檢測試劑盒 ? 人巨細胞病毒 DNA的提?。馨图毎奶崛。? 4℃ 放置或用于 PCR 振蕩混勻5~10s 12022rpm，5min 熒光定量 PCR擴增過程 50℃ 94℃ 2min 5min 93℃ 15s 57℃ 30s Stage1 Stage2 Stage3 45 1 1 25℃ 1min Stage4 1 DNA濃縮液的作用 ? DNA濃縮液的成分： PEG6000、 NaCl ? PEG（聚乙二醇）的作用： PEG與自由水分子結(jié)合，同時蛋白質(zhì)表面的水化膜被奪走，與水分子結(jié)合的極性集團轉(zhuǎn)而與多聚物的氧原子或者氫氧根結(jié)合，形成蛋白質(zhì)與多聚物的復(fù)合體，從溶液中沉淀析出。 提高低濃度標本的檢出率 。 ? PEG的濃度與沉淀出的 DNA片段大小成反比。 DNA濃縮液的作用 ? NaCl的作用：在細胞內(nèi) DNA與蛋白質(zhì)結(jié)合成 脫氧核糖核蛋白 DNP ，而 RNA與蛋白質(zhì)結(jié)合成為核糖核蛋白 RNP,在不同鹽濃度中二者溶解度不一樣。 ? DNP在純水或者 1~2M的 Nacl溶解度較大，在，而 RNP溶解度較大，因此 利用 RNP和 DNP。 DNA提取液的作用 ? DNA提取液的主要成分： NP40 TritonX100 Chelex100 EDTA() TrisHCl (pH ) NaOH （乙基苯基聚乙二醇）很溫和的去垢劑， 1%濃度的基本可以破壞掉胞膜，而對核膜破壞的作用弱 （聚乙二醇辛基苯基醚 ）一種非離子性去垢劑，被用來做細胞破膜劑 /細胞通透劑 （聚苯乙烯二乙烯基苯）提取 DNA過程中，Chelex100能有效除去非核酸有機物 螯合 Mg、 Ca等二價金屬離子，抑制依賴金屬離子的脫氧核糖核酸酶對 DNA的降解作用 （三羥甲基氨基甲烷）與鹽酸按比例混合后形成的一種緩沖液體系， DNA在這一體系中呈穩(wěn)定態(tài) 核酸在 pH 5~9是穩(wěn)定的，pH12 /3會引起雙鏈之間氫鍵解離而變性 淋巴細胞分離液的作用 ? 人外周血中各種細胞的密度不同，紅細胞為，粒細胞為 ，淋巴細胞為177。 。 ? 淋巴細胞分離液密度為 ~，密度梯度離心法原理是根據(jù)各類血細胞比重的差異，利用 比重介于某兩類細胞之間的細胞分離液 對血液進行離心，使血細胞按照相應(yīng)的密度梯度分布于不同的位置，從而達到分離的效果。 ？問？題？ ? PCR的中文名稱，一般包括哪幾個反應(yīng)過程？ ? 在 PCR中我們常用到的酶是什么？有什么優(yōu)點？ ? 熒光共振能量轉(zhuǎn)移的原理？ ? 有效防止和消除氣溶膠污染的方法？ ? 在臨床血液標本采集中哪種抗凝劑不能使用？ ? 淋巴細胞分離液的作用原理？
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1