[醫(yī)藥衛(wèi)生]基因擴增技術pcr-資料下載頁
2025-03-22 06:52本頁面
【正文】 結合，因此其靈敏度很高。 缺點 ： 由于 SYBR Green I與所有的雙鏈 DNA相結合，引物二聚體、單鏈二級結構以及非特異擴增產(chǎn)物可引起假陽性。因此，只限于分析特異性擴增產(chǎn)物；（可用溶解曲線分析產(chǎn)物的特異性）染料可影響擴增效率。 實時定量 PCR的 Ct值概念 Ct值是實時定量 PCR技術中進行定量的一個重要參數(shù) 。 閾值 是顯著大于背景信號的熒光信號值 。它總是出現(xiàn)在擴增的指數(shù)期 。 達到熒光閾值所需的 最小循環(huán)數(shù) 為 Ct值 。 在反應的起始 ， 模板數(shù)越多 ， 達到熒光信號閾值所需的循環(huán)數(shù)越少 。 實時定量 PCR檢測前列腺基質(zhì)細胞中 GAPDH 和 TGFb1 表達的熒光曲線圖 (SYBR Green I 摻入法 ) 實時定量 PCR檢測前列腺基質(zhì)細胞中 GAPDH 和 TGFb1 表達的 熔解曲線圖 （單一峰表明產(chǎn)物是單一的，無非特異擴增 ） 實時定量 PCR檢測前列腺基質(zhì)細胞中 TGFb1的表達 Well Gene Ct ?Ct ??Ct 2??Ct control GAPDH 0 1 TGFb1 plasmid GAPDH TGFb1 plasmid+siRNA GAPDH control TGFb1 TGFb1 plasmid TGFb1 TGFb1 plasmid+siRNA TGFb1 ?Ct=目的基因的 Ct值 內(nèi)參照基因的 Ct值 ? ? Ct=實驗組樣品的 ?Ct對照組樣品的 ?Ct 01234567control TGFb1 plasmid TGFb1 plasmid+siRNA實時定量 PCR檢測前列腺基質(zhì)細胞中 TGFb1表達的柱形圖 TaqMan探針檢測 PSA質(zhì)粒 （ 107拷貝至 103拷貝）的熒光曲線圖 TaqMan探針檢測 PSA質(zhì)粒的 Ct值得出的標準曲線 y=0,23x+11,06。 r2=0,993 （ y是模板的對數(shù)， x是 Ct） 實時 PCR定量檢測將 LNCap細胞梯度摻入到 4ml外周血中 PSA的表達（ TaqMan探針方法） 根據(jù)回歸方程和 Ct值，計算的得到的 PSA的拷貝數(shù) (之間相差沒有 10倍，可能是擴增效率的原因， 因為擴增質(zhì)粒的效率是最高的） 摻入的 LNCap數(shù) Ct PSA的拷貝數(shù) 1/4mL外周血 1932 10/ 4mL外周血 6531 100/ 4mL外周血 29 24547 1000/ 4mL外周血 92257 學術梯隊 1999年 11月，奧地利因斯布魯克大學（ Innsbruck University） 泌尿醫(yī)院前列腺研究中心主任 Helmut Klocker教授應邀來實驗室參觀講學。 2022年 9月，美國西北大學（ Northwestern University）醫(yī)學院 泌尿?qū)嶒炇抑魅?Chung Lee（李鐘）教授應邀來實驗室參觀講學。 2022年 10月，“山之內(nèi)制藥公司”歐洲部醫(yī)藥信息辦公室泌尿?qū)W 項目主管 Yong Xue（薛勇）博士來實驗室參觀講學。 美國塔芙茨大學新英格蘭醫(yī)學中心分子生理學 實驗室主任、南開大學特聘講座教授朱彥來實驗室講學 2022年 11月美國德州西南醫(yī)學院 Lin 來訪 舒適、整潔的大家庭 學生查閱試劑目錄 師生共同研讀專業(yè)文獻 潔凈的細胞培養(yǎng)室 分子生物學實驗室 I 分子生物學實驗室 II 學生自習室 潔凈的細胞培養(yǎng)室 分子生物學實驗室 I 分子生物學實驗室 II 學生自習室 實驗準備室 謝謝！
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