【正文】 度監(jiān)測的采樣點數目及其布置應根據產品的生產及工藝關鍵操作區(qū)設置。一般高效過濾器裝在末端（天花板）的HVAC系統(tǒng)及在層流罩下只需在工作區(qū)（～1m處）設置測點即可；而高效過濾器裝在空調器內的及亞高效過濾器（效率為≥95%）的HVAC系統(tǒng)除在工作區(qū)設置測點外，還需在每個送風口處（）設置測點。（3）懸浮粒子潔凈度測定的最小采樣量和最少采樣點數目參見《粒子測試方法》的規(guī)定，國外某些公司做法見表2.（4）懸浮粒子潔凈度級別的結果評定參見《粒子測試方法》的兩個條件?；钗⑸餃y定活微生物測定的目的是確定浮游的生物微粒濃度和生物微粒沉降密度，以此來判斷潔凈室是否達到規(guī)定的潔凈度。因此活微生物的測定有浮游菌和沉降菌兩種測定方法。細菌通常看不見，將它們采集或沉降到培養(yǎng)基中培養(yǎng)。細菌培養(yǎng)時，由一個或幾個細菌繁殖而成的一細菌團稱為CFU（菌落形成單元數），亦稱菌落數。浮游菌用計數CFU/L或CFU/m3表示，沉降菌用沉降濃度CFU/皿、min表示。我國《GMP》采用了與歐州共同體GMP一樣的浮游菌標準（CFU/m3）。由于我國用于檢測浮游菌濃度的儀器還不普遍,許多企業(yè)還是采用沉隆菌的測試方法,所以這兩種方法并存,浮游菌與沉降菌的關系存在著以下近似公式：Ng=NVSFt 式中： Ng在f面積上的細菌沉降數（CFU）； N空氣中的浮游菌濃度（CFU/cm2）； f沉降面積（cm2）； VS含菌粒子沉降速度（cm/s）； T沉降時間（S）。 （1）浮游菌的測定 浮游菌的測定可以參見國家醫(yī)藥管理局即將頒發(fā)的待業(yè)標準《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室和潔凈區(qū)中浮游菌的測試方法》（以下簡稱《浮游菌的測試方法》），基本內容如下：A、浮游菌的測定是通過收集懸浮在空氣中的生物性微粒子，通過專門的培養(yǎng)基，在適應的生長條件下，讓其繁殖到可見的菌落進行計數，從而判定潔凈環(huán)境中單位體積空氣中菌落數的多少。B、浮游菌測定需有專門的采樣器、真空抽氣泵等設備，浮游菌采樣器常用撞擊法中的狹縫式采樣器。C、采用的浮游菌采樣器必須要有流量計和定時器，并嚴格按儀器說明書的要求定期進行校驗和操作。D、浮游菌測定的采樣點及數目與懸浮粒子測定相同，即在同懸浮粒子相同的測定點采樣。E、浮游菌潔凈度測定的最小采樣量和最少采樣點數目參見《浮游菌測試方法》的規(guī)定。國外某些做法見表3。F、浮游菌潔凈度的結果評定參見《浮游菌測試方法》的規(guī)定。（2）沉降菌的測定沉降菌是用暴露法收集降落在培養(yǎng)皿中的活生物性粒子，然后加以培養(yǎng)，繁殖后加以計數得到的，其沉降濃度表示CFU/皿、min。此外用擦試方法收集培養(yǎng)的建筑物表面（墻面、地板、天花板等）以及操作人員衣著上的細菌亦屬于沉降菌測試的內容。沉降菌的測定可參見國家醫(yī)藥管理局即將頒發(fā)的行業(yè)標準《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室和潔凈區(qū)中沉降菌的測試方法》（以下簡稱《沉降菌測試方法》），其基本內容如下：A、沉降菌測定的設備主要是φ90180。150玻璃培養(yǎng)皿和各種培養(yǎng)基（常用普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基）。B、沉降菌測定其培養(yǎng)皿應布置在有代表性的地方和氣流擾動最小的地方，其最少采樣點數目見表4。C、采樣方法及培養(yǎng)：將培養(yǎng)皿按要求放置后，打開平皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露30分鐘后，將平皿蓋蓋上，然后在30～35℃的條件下（可用恒溫培養(yǎng)箱）培養(yǎng)48小時后計數。D、結果計算；Σmi M=———— N 式中：M平均菌落數(CFU)； Mi1，2，3，……n號平皿菌落數； n平皿總數。表4 最少采樣點數目面積潔凈度級別m210010000100000102~323104222082240164210040103200802064001604013100040010032200080020063注：表中的面積，對于單向流潔凈室，是指送風面積 ；對于亂流潔凈實是指房間的面積。在滿足最少測點數的同時，還要滿足最少培養(yǎng)皿數，如表28所示。不論面積大小，作為一個被測對象，都應該滿足這個要求.表28 最少培養(yǎng)皿數潔凈度級別所需 90mm培養(yǎng)皿數（）100141000021000002F、結果評定，見表29。表29 沉降菌合格界限潔凈度級別沉降菌落數(CFU/皿)10010000100000平均〈1平均〈3平均〈10（一）表21 國內及國外環(huán)境驗證時某些做法對最小采樣點數目的規(guī)定（二）懸浮粒子浮游菌驗證測定時的采樣量 最少采樣量表凈化級別懸浮粒子浮游菌工作區(qū)送風口工作區(qū)送風口每個采樣點lft3采樣量的數目每點采樣量m3100102210015221001522（三）、懸浮粒子和浮游菌結果判斷表22 國內與國外環(huán)境驗證時某些做法的評價標準潔凈度級別《懸浮粒子測試方法》國外某些驗證時做法《浮游菌測試方法》懸浮粒子數p/m3/（p/ft3）總懸浮粒子數平均值 p/m3/（p/ft3）總浮游菌濃度均值CFU/3平浮游菌濃度平均值 CFU/3CFU/3驗證日常監(jiān)測1003500(100)0875(25)11210035000(10000)2000(57)87500(2500)2220100350000010000020000(570)875000(25000)20201000(1)此表為動態(tài)時的評定標準.(2)靜態(tài)測試標準沒有說明.(3)對單向流,測試在HVAC系統(tǒng)至少運行10min后進行.(1)靜枋測試狀態(tài),房間中只有一個測試人員.(2)高效過濾器DOP栓漏試驗在過去的一年中完成并有記錄.(3)對單向流,測試在HVAC系統(tǒng)至少運行2h后進行。對非單向流,至少在運行30min后進行.(4)浮游菌測試應在房間消毒后進行.十二、潔凈室的消毒方法醫(yī)藥工業(yè)潔凈室與其他工業(yè)潔凈室有所不同，特別是無菌生產，不僅要控制空氣中一般的懸浮狀態(tài)的氣溶膠粒子，還要控制活微生物數，即提供所謂的“無菌”環(huán)境（無菌室）。當然“無菌”是相對的，它可以用無菌保證率STA（Sterilty Assurance Level）來表示。醫(yī)藥工業(yè)上獲得無菌空氣的方法大致可以分為兩大類：滅菌利用加熱（干熱、濕熱）、化學試劑（如甲醛、環(huán)氧已烷）、臭氧、射線（如紫外燈照射）等方法，使空氣中細菌的蛋白質變性以滅菌。除菌利用過濾介質（如各類空氣過濾器、高效過濾器）或靜電除塵法將空氣中塵埃、雜菌、予以捕集截留。事實上，工業(yè)應用的除菌方法往往也不是單一的，而是兩者的結合，對于流動的空氣（如HVAC系統(tǒng)、壓縮空氣）常采用過濾介質除菌，而對于靜止環(huán)境內空氣，常采用滅菌法，用于無菌室、培養(yǎng)室、傳遞窗、衣服等的滅菌。利用過濾介質除菌我們已在前面HVAC系統(tǒng)驗證中作過介紹。按理說，順HVAC系統(tǒng)中，送入經高效過濾器過濾的空氣，可以使房間的活微生物數控制在規(guī)定的范圍內。其實不然，實際生產時，由于機器的運行、人員的進出，建筑物的表面均會產生塵粒，從而滋生細菌并極易再吹落，特別是人員的污染幾乎是唯一的細菌來源，一個人每小時約散發(fā)1000只死皮細胞（等價于20μm大小的粒子）因此無菌室的室內建筑材料、潔凈服裝的洗滌、晾干、包裝必須在潔凈環(huán)境中進行；無菌衣要經高溫消毒滅菌；人員、設備、儀器進入無菌室應伯嚴格的消毒滅菌處理；（人手需用消毒藥物或噴灑）；定期進行室內消毒滅菌操作。各國GMP均對潔凈室中空氣浮游菌及表面細菌有嚴格的規(guī)定，如USP建議潔凈環(huán)境中的細菌允許值如表6所示：由于藥品生產時，在潔凈室的地面、墻面、頂棚、機器、人體衣服表面可能有活微生物粒子存在，當溫濕度合適時，細菌即在這些表面繁殖，并不時被氣流吹散到室內。因此潔凈室（特別是無菌室）一般不按排三班生產，每天必須有足夠時間用于清潔、消毒。表6 細菌允許值潔凈級別浮游菌CFU/inch3表面細菌CFU/inch2人體細菌CFU/inch2手套其他10013351000及1000055/10（地板）510100000或以上8720/30（地板）1530消毒的方法常見的表面消毒滅菌方法有紫外燈照射，臭氧接觸，過氧已酸、環(huán)氧已烷等氣體熏蒸、消毒劑噴灑等。清潔和滅菌是驅除微生物污染的主要手段，但必須保證清潔及滅菌的徹底性，因此藥品生產企業(yè)必須制定清潔與滅菌規(guī)程，并定期進行驗證，以確證清潔與滅菌劑及濃度、消毒設備、消毒時間以及最后的環(huán)境監(jiān)測。A、紫外燈消毒滅菌紫外線滅菌燈（簡稱紫外燈）在其它消毒方法未使用之前，為藥品生產企業(yè)普遍采用，主要用在潔凈工作臺、層流罩、物料傳遞窗、風淋室乃至整個潔凈房間的消毒，由于目前已有了其它好的滅菌方法，潔凈室內是否安裝紫外線殺菌力最強，紫外線波長為136~390nm,，但紫外線穿透力極弱且存在照射死角，只適用于表面殺菌；B、臭氧消毒臭氧廣泛存在于自然界中，雷雨過后的空氣有一種“清新”感覺，是因為空中放電產生臭氧，消滅了空氣中的細菌和微生物凈化了空氣。人們在松林中也會嗅到臭氧的氣味，是因為松樹脂氧化產生臭氧。地球大氣圈的平流層中，由于受太陽紫外線的強烈照射以及宇宙射線的激發(fā)而產生臭氧，這里臭氧集中形成一個臭氧層，它象一把保護傘擋住太陽的紫外線和宇宙射線使地球的生物免危害?？茖W研究表明，臭氧具有強烈的殺菌消毒作用。臭氧（O3）的消毒原理是：臭氧在常溫、常壓下分子結構不穩(wěn)定，很快自行分解成氧（O2）和單個氧原子（O），后者具有很強的活性，對細菌有極強的氧化作用，臭氧氧化分解了細菌內部氧化葡萄糖所必須的酶，從而破壞其細胞膜，將它殺死。多余的氧原子則會自行重新結合成為普遍氧分子（O2），不存在任何有毒殘留物，故稱無污染消毒劑。它不但對各種細菌（包括肝炎病毒、大腸桿菌、綠濃桿菌及雜菌等）有極強的殺滅能力，而且對殺死霉菌也很有效。生產臭氧的原料主要是空氣和電能，一般通過高頻氧發(fā)生器（電子消毒器）來獲得。消毒時，直接將臭氧發(fā)生器置于房間中即可，空氣中使用臭氧消毒的濃度很低，只有幾個PPm，可根據房間體積及臭氧發(fā)生器的臭氧產量來計算得到。臭氧消毒效果的驗證中需確認和校正的臭氧發(fā)生器技術指標主要有：臭氧產量、臭氧濃度和時間定時器，并通過驗證檢查細菌數來確定消毒時間。C、氣體滅菌對環(huán)境空氣的滅菌傳統(tǒng)做法是采用某種消毒液在一定條件下讓其蒸發(fā)產生氣體來熏蒸。消毒液有甲醛、環(huán)氧已烷、過氧已酸、石碳酸和乳酸的混合液等。在所有的消毒液中，甲醛是最常用的，當相對濕度65%以上，溫度在24～40℃時，甲醛氣體的消毒效果最好，但采用過多的甲醛，會因聚合而析出白色粉末附著在建筑物或設備表面 ，顧應采用合理的消毒方法來進行。甲醛消毒滅菌的氣體發(fā)生量、熏蒸時間、換氣時間等應以驗證結果來最后確定。D、消毒劑滅菌潔凈室的墻面、天花板、門、窗、機器設備、儀器、操作臺、車、桌、椅等表面以及人體雙手（手套）在環(huán)境驗證及日常生產時，應定期清潔并用消毒劑噴灑。常見的消毒劑有民丙醇（75%）、已醇（75%）、戍二醛、潔爾滅等。無菌室消毒我國藥廠傳統(tǒng)的方法是用甲醛熏蒸，國外藥廠認為甲醛對人體有一定的危害，現普扁采用戍二醛（glutaraldehyde）噴灑，其方法是將戍二醛放在帶有時間控制的自動噴霧器中，在下班后或周未，無菌室內無人時自動噴灑，其噴灑量可以調節(jié)，時間可以設定，在噴灑期間空調系統(tǒng)應停止工作。無菌室用的消毒劑必須在層流工作臺中。十三、其它在制藥企業(yè)潔凈廠房建設中，只有學習掌握了政策法規(guī)性文件（99版《GMP》規(guī)范、《潔凈廠房設計規(guī)范》、《潔凈室施工驗收規(guī)范》等）才能合理高效地實現建設目標，了解更多的制藥生產中的特殊要求和凈化方面的知識將有助于服務于潔凈廠房的建設一次通過國家GMP認證。本文僅供各位學友交流指正，在編寫中參考了以下文獻，亦誠推薦給各位學友。《藥品生產質量管理規(guī)范》（1999年修訂） 國家藥品監(jiān)督管理局《藥品GMP實施與認證》 李 鈞 主編《空氣調節(jié)設計手冊》 電子工業(yè)部第十一設計研究院 主編《空氣潔凈技術原理》 許鐘麟 主編《制藥工業(yè)的潔凈與空調》 涂光備 主編《潔凈室設計》 許鐘麟 主編《HVAC暖通空調設計指南》 陸耀慶 主編