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2025-03-22 02:18本頁面
  

【正文】 生物界 真菌界 病毒界 培養(yǎng)基可以分為哪兩類? 培養(yǎng)基一般都含有哪些營養(yǎng)物質(zhì),此外 還要滿足哪些要求? 獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是什么? 避免雜菌污染的方法主要包括哪四個方面 什么是消毒、滅菌,常用方法有哪些? 制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的方法步驟 如何倒平板? ( 1)按物理狀態(tài)來分:培養(yǎng)基可分為 固體培養(yǎng)基 和 液體培養(yǎng)基 。其中固體培養(yǎng)基用于菌種分離、鑒定菌落等。 ( 2)按功能來分,可分為 選擇培養(yǎng)基 和 鑒別培養(yǎng)基 。 ( 3)按成分來分,可分為 天然培養(yǎng)基 和 合成培養(yǎng)基 。 培養(yǎng)基分類: 一、培養(yǎng)基 選擇培養(yǎng)基 加入青霉素的培養(yǎng)基 : 分離酵母菌、霉菌等真菌 加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基 : 分離金黃色葡萄球菌 不加氮源的無氮培養(yǎng)基 : 分離固氮菌 不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基 : 分離自養(yǎng)型微生物 加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基 : 分離導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞 不管哪種培養(yǎng)基,一般都含有 水 、 碳源 、和 氮源 、 無機(jī)鹽 等營養(yǎng)物質(zhì),另外還需要滿足微生物生長對 pH、 特殊營養(yǎng)物質(zhì) ,例如 :生長因子 (即細(xì)菌生長必需,而自身不能合成的化合物 ,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶 )以及 氧氣 、 二氧化碳 、 滲透壓 等的要求。 培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì) ( 1)培養(yǎng)基一般都含有哪些營養(yǎng)物質(zhì),此外 還要滿足哪些要求? ( 2)獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是什么? ( 3)避免雜菌污染的方法主要包括哪四個方面 ( 4)什么是消毒、滅菌,常用方法有哪些? 消毒與滅菌 消毒: 指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法 僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害 的微生物(不包括芽孢和孢子)。 滅菌: 指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi) 外所有微生物,包括芽孢和孢子。 滅菌與消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工作中最普通也是最重要的技術(shù)。 二、無菌技術(shù) 消毒的方法: 煮沸消毒法 :100℃ 煮沸 56min 巴氏消毒法: 7075 ℃ 下煮 30min或 80 ℃ 下煮 15min 化學(xué)藥劑消毒法 :用 75%酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒 。氯氣消毒水源 紫外線或化學(xué)藥物消毒 滅菌的方法: 灼燒滅菌 干熱滅菌: 160170 ℃ 下加熱 12h。 高壓蒸汽滅菌: 100kPa、 121 ℃ 下維持 1530min. 制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的方法步驟 如何倒平板? 三、實(shí)驗(yàn)操作 制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基 培養(yǎng)基滅菌后,需要冷卻到 50 ℃ 左右時,才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度? 答: 可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶,感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時,就可以進(jìn)行倒平板了。 為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰? 答:通過灼燒滅菌,防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。 問題討論: 平板冷凝后,為什么要將平板倒臵? 在倒平板的過程中,如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位,這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎?為什么? 答:平板冷凝后,皿蓋上會凝結(jié)水珠,凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高,將平板倒臵,既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā),又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基,造成污染。 答:空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生,因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。 純化大腸桿菌 接種方法有: 平板劃線法和稀釋涂布平板法 平板劃線法 :通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)畫線的操作 ,將聚集的菌鐘逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面 . 在數(shù)次畫線后 ,可以分離到由一個細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體 ,這就是菌落 . 微生物的恒溫培養(yǎng) 為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)?在劃線操作結(jié)束時,仍然需要灼燒接種環(huán)嗎?為什么? 答:操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物;每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后,接種環(huán)上殘留的菌種,使下一次劃線時,接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端,從而通過劃線次數(shù)的增加,使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少,以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán),能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種,避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。 問題討論: 在灼燒接種環(huán)之后,為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線? 答:以免接種環(huán)溫度太高,殺死菌種。 在作第二次以及其后的劃線操作時,為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線 ? 答:劃線后,線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少,每次從上一次劃線的末端開始,能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少,最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落。 涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求,想一想,第 2步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作? 應(yīng)從操作的各個細(xì)節(jié)保證“無菌”。例如,酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。 問題討論: 菌種的保存 臨時保藏:接種到固體斜面培養(yǎng)基,菌落長成后臵于 4℃ 冰箱保存。 長期保存:甘油冷凍管藏法
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