氨基酸螯合鋅和維生素e互作對肉仔雞生長、免疫和抗氧化功能的影響-開題報(bào)告-資料下載頁
2025-01-12 14:33本頁面
【正文】 所需試劑 4%副品紅鹽酸溶液； 4%亞硝酸鈉水溶液 (現(xiàn)用現(xiàn)配 )； 2%α一乙酸萘酯乙二醇甲醚溶液 (現(xiàn)用現(xiàn)配 )；福爾馬林一丙酮固定液； 磷酸鹽緩沖液 (PBS)； %孔雀綠染色液；孵育液配制 (現(xiàn)用現(xiàn)配 )。 操作步驟 靜脈取血 ， 載玻片上涂血片 2張 ， 晾干 ， 將血片置冷的福爾馬林一丙酮固定液中 ， 4℃ 下固定 lmin。 取出血片用自來水沖洗 3min， 用蒸餾水沖掉自來水 ， 室溫干燥；將血片放入孵育液中 ， 37℃ 孵育， 取出血片 ， 水洗 3min， 用雙餾水沖去沉淀物 ， 孔雀綠染色液復(fù)染 lmin， 自來水和雙餾水先后沖洗 ， 晾干 ， 油鏡觀察 ， 計(jì)數(shù) 100個(gè)淋巴細(xì)胞 ， 求出 ANAE陽性細(xì)胞百分比 。 [2]淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn) 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化是體外檢測 T淋巴細(xì)胞功能的一種方法。取肝素抗凝血 ，無菌加入 RPM11640完全培養(yǎng)液 (含 20%小牛血清，青霉素、鏈霉素各 100ug/m1， ，)，再加入 ，置 37℃ 3天，每天搖動一次。取出后吸出大部分上清夜，加入 ，混勻后置 37℃ 水浴10分鐘。 2500離心 l0分鐘，棄上清，沉淀后加 5ml固定液 (甲醇：冰醋酸 =9:1)，室溫中 l0分鐘后離心棄上清，留 。輕輕混勻后滴加于一潔凈玻片上，使其均勻鋪開。自然干燥后用Giemsa染液染色，油鏡一下觀察 200個(gè)淋巴細(xì)胞，計(jì)算其母細(xì)胞轉(zhuǎn)化率。 [3]酶聯(lián)免疫吸附方法 一、主要儀器 酶聯(lián)免疫檢測儀 (Bio－ 550) 酶標(biāo)板 (96孔 ) 微量注射器。 二、主要試劑 HRP標(biāo)記羊抗兔 Ig G(1:1 000， 國產(chǎn) )；標(biāo)準(zhǔn)牛 IgG；兔抗牛血清 （ 1： 32） ； 碳酸鹽一重碳酸鹽緩沖液 (pH= )；檸檬酸鹽緩沖液 (pH =)； 磷酸鹽緩沖液PBS ； ELISA緩沖液： PBS + 1 % BSA ；清洗液： PBS+0 .05%Tween 20；底物溶液貯液為 20 mg/ml ABTS，使用時(shí)用檸檬酸鹽緩沖液稀釋 20倍，再用等體積的%H2O稀釋；終止液。 三、操作步驟 1. 包被抗原和洗滌 2. 加封閉液 200微升， 37℃ 放置一小時(shí)。洗滌 (同 2 ). 3 . 加被檢血清：用稀釋液將被檢血清作幾種稀釋 , 每孔 200微升。同時(shí)作稀釋液對照。 37℃ 放置 2小時(shí)。洗滌 (同 2 ). 4. 加辣根過氧化物酶羊抗兔 IgG, 每孔 200微升 , 放置 37℃ 1小時(shí)，洗滌 (同 2 ) 。 5. 加底物：鄰苯二胺溶液加 200ml，室溫暗處 1015分鐘。 6. 加終止液：每孔 50微升。 7. 觀察結(jié)果：用酶聯(lián)免疫檢測儀記錄 490nm讀數(shù)。
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