【正文】 力 沙門菌 RVS肉湯 促生長能力 S paratyphi B 抑制能力 木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂 促生長能力 +指示能力 S paratyphi B 指示能力 銅綠假單胞菌 溴化十六烷基三甲銨瓊脂 促生長能力 抑制能力 金黃色葡萄球菌 甘露醇鹽瓊脂 促生長能力 +指示能力 抑制能力 梭菌 梭菌增菌培養(yǎng)基 促生長能力 Cl. sporogenes 哥倫比亞瓊脂 促生長能力 Cl. sporogenes 白色念珠菌 沙氏葡萄糖肉湯 促生長能力 沙氏葡萄糖瓊脂 促生長能力 +指示能力 中國藥品生物制品檢定所 33 玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基的專屬性 ? 圖 15：當(dāng)染菌較多時，玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基生長大量的細菌，給結(jié)果判斷帶來困難。 中國藥品生物制品檢定所 34 玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基的專屬性 ? 以中檢所玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基（批號： 050428 ）與營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（批號： 050523 ）比較，加入 50～ 100cfu陽性菌在相同條件培養(yǎng)觀察，見下表 9： 大腸 銅綠 金葡 枯草 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 35℃ 培養(yǎng) 48hrs 75 81 91 79 玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基 35℃ 培養(yǎng) 48hrs 57 47 0 0 玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基 25℃ 培養(yǎng) 72hrs 45 41 0 0 表 玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基專屬性實驗結(jié)果 中國藥品生物制品檢定所 35 技術(shù)現(xiàn)狀與標(biāo)準(zhǔn)化 ? 2）、自動化程度低，仍然依賴大量的人工 ? 以方法驗證為基礎(chǔ)，引入更為便捷的供試品前處理技術(shù)，規(guī)范供試品前處理 ? 有條件的地方可以考慮引入自動稀釋、自動接種、儀器判讀結(jié)果等設(shè)備和技術(shù) ? 3）、 75mm薄膜過濾器的研制 ? 征對我國中成藥品種多、情況復(fù)雜，開發(fā)研制的 75mm薄膜過濾器在目前的驗證工作中發(fā)揮了重要作用（圖 16～ 17）。 中國藥品生物制品檢定所 36 微生物限度檢查的幾個問題 ?原料藥的微生物標(biāo)準(zhǔn)問題； ?藥材原粉的界定問題； ?含豆豉、神曲等發(fā)酵成分的中成藥制劑標(biāo)準(zhǔn)問題； ?純化水微生物限度檢查問題； 中國藥品生物制品檢定所 37 原料藥的微生物標(biāo)準(zhǔn)問題 ? 原料藥是藥品生產(chǎn)過程中引入微生物污染的重要來源之一，雖然一些藥品在生產(chǎn)過程或終產(chǎn)品階段可以采取一些滅菌措施殺滅污染微生物，但可能因為由此引入的死菌體、毒素等無法消除而危害患者，而原料藥過高的微生物荷載可能直接挑戰(zhàn)一些滅菌措施的有效性，造成滅菌失敗，使藥品存在更大的安全隱患。所以世界各國藥典均規(guī)定應(yīng)對原料藥進行微生物檢查，以消除或控制其對藥品引入的微生物污染。 ? 在嚴格執(zhí)行藥品 GMP的前提下，國外藥典更為重視原料藥的微生物檢查，尤其是對一些非滅菌制劑，甚至僅僅對原料藥有微生物限度控制要求，而對制劑沒有強制要求。中國藥典 2022版參考了國外藥典的這一發(fā)展趨勢，對于化學(xué)藥品的片劑、膠囊劑、顆粒劑等 6個主要口服制劑在各論和制劑通則中均未做微生物限度檢查的強制要求，僅在附錄中做出通用性要求，但很多企業(yè)不清楚這一變化的背景和兩個必要前提，即嚴格的原料藥微生物控制和嚴格的 GMP管理，從而放松了對這些產(chǎn)品的微生物控制，可能會存在潛在風(fēng)險。 ? 中國藥典規(guī)定，對藥品原輔料藥的微生物檢查參照相應(yīng)用途的藥品進行，即用于非滅菌制劑生產(chǎn)的原料藥應(yīng)按相應(yīng)制劑的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)進行微生物限度控制；而用于滅菌制劑的原料藥一般應(yīng)符合無菌要求。考慮到生產(chǎn)過程中污染微生物可能發(fā)生的變化，國外企業(yè)通常在生產(chǎn)上自覺執(zhí)行比制劑要求更為嚴格的原料藥微生物。 中國藥品生物制品檢定所 38 原料藥的微生物標(biāo)準(zhǔn)問題 ? （ 1）重視不夠 ? 目前一些企業(yè)對原料藥微生物控制的重要性和意義認識不夠，對源頭上的問題解決不好，加之 GMP執(zhí)行流于形式，造成了頻繁的藥品微生物污染事故發(fā)生。 ? （ 2）標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)不清楚 ? 目前中國藥典絕大多數(shù)藥品原輔料各論項下沒有明確的微生物檢查標(biāo)準(zhǔn)，而是需要根據(jù)實際用途去確定相應(yīng)的控制標(biāo)準(zhǔn)。 ? （ 3）抽樣不正確 ? 原料藥微生物檢查的抽樣除了應(yīng)參照相應(yīng)的抽樣原則，還應(yīng)強調(diào)的一點是抽樣的環(huán)境要求和無菌操作要求，不當(dāng)?shù)某闃臃椒ú粌H可以使得樣本對總體沒有代表意義、抽取的樣本被污染，甚至可因抽樣而污染原料。 ? （ 4）方法不合理 ? 對于原料藥微生物檢查方法驗證應(yīng)與藥品制劑微生物檢查方法驗證同等重視，否則同樣存在檢驗方法不合理、不科學(xué)，檢驗結(jié)果沒有意義的問題。 中國藥品生物制品檢定所 39 藥材原粉的界定問題 ?生藥原粉； ?動物臟器及臟器提取物。 含豆豉、神曲等發(fā)酵成分的中成藥制劑標(biāo)準(zhǔn)問題 參見： 《 淺析含豆豉、神曲等發(fā)酵成分制劑的微生物限度的沿革與現(xiàn)狀 》 ，馬仕洪、胡昌勤， 《 中國藥事 》 ， 2022， 21（ 09）： 704～ 706 中國藥品生物制品檢定所 40 純化水問題 USP31/1231Water for Pharmaceutical Purpose Drinking Water: Pour Plate Method or Membrane Filtraion Method Sample minimun Maximun action levels are 500 cfu per mL Purified Water: Pour Plate Method or Membrane Filtraion Method Sample minimun Maximun action levels are 100 cfu per mL Water for Injection: Membrane Filtraion Method Sample Volume100mL minimun Maximun action levels are 10 cfu per 100mL 中國藥品生物制品檢定所 41 純化水問題 ? 2022版二部 P303 ? 2022版二部 P412 純化水（ Purified Water） 【 檢查 】 微生物限度 取本品，采用薄膜過濾法處理后，依法檢查（附錄 XI J），細菌、霉菌和酵母菌總數(shù)每 1ml不得過 100個。 這一標(biāo)準(zhǔn)源于國外，在其需氣菌培養(yǎng)基統(tǒng)一規(guī)定的情況下簡單易行。但我國引入后，造成企業(yè)大量的意見。在藥典現(xiàn)有條件下實際采用 2ml實驗， 1ml測定細菌數(shù)、 1ml測定霉菌和酵母菌數(shù)，再加合起來作為一個檢驗結(jié)果。 主要問題還是培養(yǎng)基和檢驗體系的差異。 中國藥品生物制品檢定所 42 ?謝謝大家！