生化分離工程5親和純化-資料下載頁
2024-10-16 15:01本頁面
【正文】 pitation）是生物親和相互作用與沉淀分離相結(jié)合的蛋白質(zhì)類生物大分子的分離純化技術(shù)。 ?親和沉淀又分 ?一次作用親和沉淀 ?二次作用親和沉淀 一次作用親和沉淀 ?水溶性化合物分子上偶聯(lián)雙配基（ bisligand）或多配基（ polyligand）與多價蛋白質(zhì)（ multivalentprotein）產(chǎn)生親和交聯(lián)而沉淀的分離方法稱為 一次作用親和沉淀（ primaryeffect affinity precipitation） 。 ?一次作用親和沉淀機(jī)理與抗原 抗體的沉淀作用相似，當(dāng)配基與蛋白質(zhì)的親和結(jié)合部位的摩爾比為 1時沉淀率最高。 ? 1979年 Larsson和 Mosbach發(fā)表了利用雙輔酶Ⅰ （ bisNAD）親和沉淀乳酸脫氫酶（ LDH）的研究。 ? 1983年，利用三嗪色素（ Procion Blue HB）為配基的一次作用親和沉淀法純化免肌 LDH，收率達(dá) 97％，純度達(dá)電泳純。 ?一次作用親和沉淀僅適用于多價蛋白質(zhì)，要求配基與目標(biāo)分子的親和結(jié)合常數(shù)較高，沉淀?xiàng)l件難于掌握，并且沉淀的目標(biāo)分子與雙配基的分離困難，實(shí)用上存在較大難度。 二次作用親和沉淀 ?利用在物理場（如 pH、 離子強(qiáng)度、溫度和添加金屬金子等）改變時溶解度下降、發(fā)生可逆性沉淀的水溶性聚合物為載體固定親和配基，制備親和沉淀介質(zhì)。 ?親和介質(zhì)結(jié)合目標(biāo)分子后，通過改變物理場使介質(zhì)與目標(biāo)分子共同沉淀的方法稱為 二次作用親和沉淀（ secondaryeffect affinity precipitation ）。 ?早期開發(fā)的可逆沉淀性親和載體分子結(jié)構(gòu)如下 。其中的芐脒基為胰蛋白酶的親和配基 ， 而苯甲酸基為 pH敏感基團(tuán) 。 ?該聚合物可溶解于 pH＞ 6的水溶液 ， 但當(dāng) pH＜5時即可發(fā)生完全的沉淀 。 ?例 牛胰蛋白酶的純化 ① 將該聚合物加入到 pH ， 充分混合 。 ② 加酸使 pH值降至 ， 則聚合物與胰蛋白酶結(jié)合沉淀 。 ③ 離心回收沉淀 ， 并用 pH 。 ④ 再加酸使 pH降至 ， 洗脫回收胰蛋白酶 。 ?利用該方法純化牛胰蛋白酶的收率為 76％ ， 純度提 ， 達(dá) 92％ 。 ?二十五 10,12二炔 1醇磷脂乙醇胺 [CH3（ CH2） 11C≡CC≡C（ CH2） 9OPO3HCH2 CH2NH2] 水懸浮液在超聲波處理下形成 ～ μm的脂質(zhì)體（ liposome），表面為親水性乙醇胺基團(tuán)。 該脂質(zhì)體溶液在紫外線照射下可發(fā)生聚合反應(yīng)，形成聚合脂質(zhì)體（ polymerized liposome， PLS）。 PLS具有在鹽的作用下發(fā)生可逆性沉淀的性質(zhì)。 ?利用這一性質(zhì)，將粗制大豆胰蛋白酶抑制劑（ STI）共價偶聯(lián)在 PLS表面，制成親和沉淀介質(zhì) STIPLS。 利用 STIPLS親和沉淀純化胰蛋白酶收率保持在 80%以上，純化倍數(shù)達(dá) 。 磁性親和分離 ?磁性親和分離的載體為磁性高分子微球。 ?磁性高分子微球是指含有磁性金屬或金屬氧化物（如 Fe、 Co、 Ni及其氧化物）的超細(xì)粉末而具有磁響應(yīng)性的高分子微球。 ?磁性高分子微球的制備 ?表面化學(xué)修飾 ?磁性分離裝置 ?磁性高分子微球的應(yīng)用 磁性高分子微球的制備 ?磁性高分子微球一般為核／殼式結(jié)構(gòu)。 ?包埋法 ?包埋法是將磁性粒子分散于高分子溶液中，通過霧化、絮凝、沉積、蒸發(fā)等手段得到磁性高分子微球。 ?單體聚合法 ?單體聚合法是在磁性粒子和單體存在下，加入引發(fā)劑、穩(wěn)定劑等進(jìn)行聚合反應(yīng)，得到內(nèi)部包有磁性微粒的高分子微球。 ?具體方法主要有：懸浮聚合、分散聚合、乳液聚合）和輻射聚合等。 表面化學(xué)修飾 ?表面功能化 ?配基固定化 磁性分離裝置 ?間歇式磁性分離裝置 ?流動式磁性分離裝置 ?梯度高磁性分離裝置 ?磁場穩(wěn)定流態(tài)化床 磁性高分子微球的應(yīng)用 ?細(xì)胞分離 ?固定化酶 ?靶向藥物 ?兩相分離 ?親和分離
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1