生化分離工程5親和純化-資料下載頁
2025-10-07 15:01本頁面
【正文】 pitation）是生物親和相互作用與沉淀分離相結合的蛋白質類生物大分子的分離純化技術。 ?親和沉淀又分 ?一次作用親和沉淀 ?二次作用親和沉淀 一次作用親和沉淀 ?水溶性化合物分子上偶聯(lián)雙配基（ bisligand）或多配基（ polyligand）與多價蛋白質（ multivalentprotein）產生親和交聯(lián)而沉淀的分離方法稱為 一次作用親和沉淀（ primaryeffect affinity precipitation） 。 ?一次作用親和沉淀機理與抗原 抗體的沉淀作用相似，當配基與蛋白質的親和結合部位的摩爾比為 1時沉淀率最高。 ? 1979年 Larsson和 Mosbach發(fā)表了利用雙輔酶Ⅰ （ bisNAD）親和沉淀乳酸脫氫酶（ LDH）的研究。 ? 1983年，利用三嗪色素（ Procion Blue HB）為配基的一次作用親和沉淀法純化免肌 LDH，收率達 97％，純度達電泳純。 ?一次作用親和沉淀僅適用于多價蛋白質，要求配基與目標分子的親和結合常數(shù)較高，沉淀條件難于掌握，并且沉淀的目標分子與雙配基的分離困難，實用上存在較大難度。 二次作用親和沉淀 ?利用在物理場（如 pH、 離子強度、溫度和添加金屬金子等）改變時溶解度下降、發(fā)生可逆性沉淀的水溶性聚合物為載體固定親和配基，制備親和沉淀介質。 ?親和介質結合目標分子后，通過改變物理場使介質與目標分子共同沉淀的方法稱為 二次作用親和沉淀（ secondaryeffect affinity precipitation ）。 ?早期開發(fā)的可逆沉淀性親和載體分子結構如下 。其中的芐脒基為胰蛋白酶的親和配基 ， 而苯甲酸基為 pH敏感基團 。 ?該聚合物可溶解于 pH＞ 6的水溶液 ， 但當 pH＜5時即可發(fā)生完全的沉淀 。 ?例 牛胰蛋白酶的純化 ① 將該聚合物加入到 pH ， 充分混合 。 ② 加酸使 pH值降至 ， 則聚合物與胰蛋白酶結合沉淀 。 ③ 離心回收沉淀 ， 并用 pH 。 ④ 再加酸使 pH降至 ， 洗脫回收胰蛋白酶 。 ?利用該方法純化牛胰蛋白酶的收率為 76％ ， 純度提 ， 達 92％ 。 ?二十五 10,12二炔 1醇磷脂乙醇胺 [CH3（ CH2） 11C≡CC≡C（ CH2） 9OPO3HCH2 CH2NH2] 水懸浮液在超聲波處理下形成 ～ μm的脂質體（ liposome），表面為親水性乙醇胺基團。 該脂質體溶液在紫外線照射下可發(fā)生聚合反應，形成聚合脂質體（ polymerized liposome， PLS）。 PLS具有在鹽的作用下發(fā)生可逆性沉淀的性質。 ?利用這一性質，將粗制大豆胰蛋白酶抑制劑（ STI）共價偶聯(lián)在 PLS表面，制成親和沉淀介質 STIPLS。 利用 STIPLS親和沉淀純化胰蛋白酶收率保持在 80%以上，純化倍數(shù)達 。 磁性親和分離 ?磁性親和分離的載體為磁性高分子微球。 ?磁性高分子微球是指含有磁性金屬或金屬氧化物（如 Fe、 Co、 Ni及其氧化物）的超細粉末而具有磁響應性的高分子微球。 ?磁性高分子微球的制備 ?表面化學修飾 ?磁性分離裝置 ?磁性高分子微球的應用 磁性高分子微球的制備 ?磁性高分子微球一般為核／殼式結構。 ?包埋法 ?包埋法是將磁性粒子分散于高分子溶液中，通過霧化、絮凝、沉積、蒸發(fā)等手段得到磁性高分子微球。 ?單體聚合法 ?單體聚合法是在磁性粒子和單體存在下，加入引發(fā)劑、穩(wěn)定劑等進行聚合反應，得到內部包有磁性微粒的高分子微球。 ?具體方法主要有：懸浮聚合、分散聚合、乳液聚合）和輻射聚合等。 表面化學修飾 ?表面功能化 ?配基固定化 磁性分離裝置 ?間歇式磁性分離裝置 ?流動式磁性分離裝置 ?梯度高磁性分離裝置 ?磁場穩(wěn)定流態(tài)化床 磁性高分子微球的應用 ?細胞分離 ?固定化酶 ?靶向藥物 ?兩相分離 ?親和分離
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