生化分離工程_蘇海佳_第三章細胞破碎-資料下載頁
2025-02-14 05:09本頁面
【正文】 。 優(yōu)點：生物轉(zhuǎn)移性強，操作條件溫和、能量低、可避免高剪切力，確保產(chǎn)物破壞最小。 缺點：費用高，時間長，多用于原生質(zhì)體 自溶作用是酶溶的另一種方式，通過調(diào)節(jié)溫度，PH或添加有機溶劑等激活劑，誘使細胞產(chǎn)生溶解自身的酶的方法，稱為自溶。 1）滲透壓沖擊法（ Osmotic Shock） 將細胞放在高滲透壓的介質(zhì)中（如一定濃度的甘油或蔗糖溶液），達到平衡后，介質(zhì)被突然稀釋，或者將細胞轉(zhuǎn)入緩沖液中，由于滲透壓的突然變化，水迅速通過細胞壁和細胞膜進入細胞，引起細胞壁和膜膨脹破裂，從而使細胞通透性增大。 4. 細胞物理破碎方法 原理 最溫和的一種方法 選擇性高，釋放速度快，工藝簡單，易放大。 適用于易破碎的細胞，和細胞壁預先受到酶處理的細胞，及合成受抑制而強度減弱的細胞，如動物細胞和革蘭氏陰性菌。 特點： 缺點：存在著高鹽濃度對產(chǎn)品污染問題。 2) 冷凍－融化法 (Freczing an thawirg) 破壞細胞膜的疏水鍵，增加其親水性和通透性，而且由于胞內(nèi)水結(jié)晶使胞內(nèi)外產(chǎn)生溶液濃度差，在滲透壓作用下引起細胞膨脹而破裂。 本法對于存在于細胞質(zhì)周圍靠近細胞膜的胞內(nèi)產(chǎn)物釋放較為有效，但由于本法成本高，只能進行小規(guī)模應用，且釋放速率慢、產(chǎn)量低，另外酶易失活也限制了它的更進一步利用。 通過水結(jié)晶的形成和隨后的融化而進行細胞破碎。 原理 冷凍的目的 缺點 5. 胞內(nèi)產(chǎn)物的選擇性釋放 細胞完全破碎的缺點：所有胞內(nèi)的蛋白質(zhì)全部釋放出來，粘度增加，雜質(zhì)增加，給后面分離純化帶來困難。 目標：細胞不完全破碎，選擇性釋放，其他物質(zhì)盡量少釋放，粗分。 生化集成：利用兩種以上的不同階段的分離過程同時進行。 原因：例如利用珠磨法破碎酵母細胞時，各種酶的釋放速度不同，靠近細胞膜和細胞壁的酶先釋放，細胞內(nèi)部或細胞器內(nèi)后釋放。 問題關鍵：了解目標產(chǎn)物的性質(zhì)及其所在位置 （ 1）破壞或破碎存在目標產(chǎn)物的位置。 如：存在于膜附近時，可采用溫和的方法，如酶溶法，滲透壓沖擊法和凍結(jié) — 融化法； 存在于細胞質(zhì)內(nèi)時，只能采用強烈的機械破碎法。 （ 2）選擇性溶解目標產(chǎn)物 當目標物處于與細胞膜或細胞壁結(jié)合的狀態(tài)時，調(diào)節(jié)pH值，離子強度或添加與目標產(chǎn)物具有親和力的試劑使目標物易于釋放，其他雜質(zhì)不易溶出。同時可采用生化集成 原則： 本章要點 珠磨法、高壓勻漿法、撞擊破碎法和超聲波法破碎細胞的基本原理和應用條件？ 胞內(nèi)產(chǎn)物的選擇性釋放的原理？
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