植物細胞工程課件第三章細胞克隆與種子細胞篩選-資料下載頁
2025-01-20 07:37本頁面
【正文】 ?常用的誘變劑有物理誘變劑和化學誘變劑兩種 。 ? 物理誘變劑：包括 X射線 、 γ射線 、 中子 、 α粒子 、 β粒子 、 紫外線等 。 紫外線的能量較低 ，不能引起被照射物質(zhì)離子化 ， 因而叫做非電離誘變因子 ， 其余物理誘變劑均稱為電離誘變因子 。 ? 物理誘變劑處理方法：外照射；內(nèi)照射 。 物理誘變劑 ?外照射 ， 即射線由被照射物質(zhì)的外部透入內(nèi)部誘發(fā)突變 。 又分為急照射和慢照射 。 ?內(nèi)照射 ， 即放射源引入到植物組織或細胞內(nèi)使其放出射線誘發(fā)突變 。 常用的方法有浸泡法 、 注射法和飼入法 。 ?化學誘變劑： 根據(jù)對 DNA的作用特點 ， 主要分三類 ， 包括堿基類似物 、 烷化劑 、 疊氮化合物 。 此外一些抗菌素也可作為誘變劑 。 ?在 DNA復制時 ， 誘發(fā)配對錯誤 。 如 5溴尿嘧啶 。 ?誘發(fā)染色體斷裂 。 如馬來酰阱 、 重氮比氨酸 、 絲裂霉素 C、鏈霉素 C等 。 ?改變 DNA的化學結(jié)構(gòu)： 甲基磺酸乙酯 、 疊氮化鈉 、 亞硝基胍等 。 化學誘變劑 誘變的基本過程 單細胞制備 預培養(yǎng) 誘發(fā)突變 篩選突變株 材料的選擇 預處理 細胞材料的制備 制備細胞懸浮液 （一）制備單細胞 ?用于突變體篩選的最理想的材料是單細胞或原生質(zhì)體 ， 也可用莖尖 、 腋芽等 。目前用得最多的材料是愈傷組織 。 材料的選擇 ?采用誘變劑進行化學誘變處理 。 根據(jù)植物種類需對誘變劑的含量 、 時間進行篩選 ， 選用最適含量 、 最適處理時間才能收到良好的效果 。 預處理 ?分離植物器官 、 誘導形成愈傷組織 、 液體培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng) ， 獲得小細胞團和單細胞的懸浮培養(yǎng)物 。 ?或從器官或細胞培養(yǎng)物游離出單個原生質(zhì)體 。 細胞材料的制備 ?經(jīng)預處理的材料用糖液洗凈備用 。 經(jīng)過過濾 、 離心沉降 ， 最后獲得純凈的細胞懸浮液 。 制備細胞懸浮液 （二）預培養(yǎng) ?單細胞或愈傷組織經(jīng)誘變劑和酶處理后活力下降 ， 必須進行預培養(yǎng) 。 ?可采用平板培養(yǎng)法 ， 也可采用懸浮培養(yǎng)法 。 （三）誘發(fā)突變 ?誘發(fā)突變一般采用平板培養(yǎng)法 ， 并在培養(yǎng)基中加入某種選擇因子 ， 長時間飼喂培養(yǎng)植物細胞 ， 使其發(fā)生擬定目標的突變 ， 反復飼喂需數(shù)月時間 。 ?細胞誘變處理指用各種物理或化學的誘變因子處理細胞材料 ， 使細胞發(fā)生突變 。 （四）突變細胞的選擇 ?將在具有選擇因子的培養(yǎng)基中培養(yǎng)數(shù)月的細胞團 ， 轉(zhuǎn)入不加選擇因子的培養(yǎng)基中培養(yǎng) ，脫除選擇因子 。 ?數(shù)周后 ， 再轉(zhuǎn)入具有選擇因子的培養(yǎng)基上 ，培養(yǎng)數(shù)周后選擇能旺盛分裂的細胞團 （ 或細胞株 ） ， 說明該細胞團具有抗某種選擇因子的突變細胞株 。 ?根據(jù)期望篩選的突變體特性 ， 向培養(yǎng)基中加入一些脅迫因素 ， 如病菌毒素 、 鹽類 、除莠劑 、 氨基酸類似物等 ， 把細胞接種到這些培養(yǎng)基上培養(yǎng) ， 結(jié)果會發(fā)現(xiàn) ， 多數(shù)正常細胞不能生長而死亡 ， 而個別突變細胞則繼續(xù)生長 ， 形成細胞團 。 （五）突變細胞的遺傳分析和鑒定 ? 根據(jù)誘發(fā)突變目標進行生長分析 、 細胞學觀察 、性狀分析 。 ? 突變后具備的特點： 1. 離開選擇壓后變異表型保持穩(wěn)定； 2. 自然變異表型發(fā)生頻率低； 3. 突變體中具有相應(yīng)變化了的基因產(chǎn)物或生理生化代謝上的差異； 4. 變異表型能夠通過有性繁殖遺傳 。 突變細胞的主要類型 ? 對氨基酸和氨基酸類似物抗性 ? 抗病細胞突變體 ? 抗除草劑細胞突變體 ? 植物抗鹽細胞突變體 ? 抗逆細胞突變體 ? 高光效突變體 ? 營養(yǎng)缺陷型細胞突變體
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