植物細胞工程課件第三章細胞克隆與種子細胞篩選(已修改)
2025-02-01 07:37 本頁面
【正文】 細胞克隆與種子細胞篩選 第三章 細胞工程電子課件 華中農(nóng)業(yè)大學生命科學技術(shù)學院 細胞克隆的概念與意義 植物單細胞培養(yǎng)技術(shù) 動物細胞克隆技術(shù) 種子細胞篩選 主要內(nèi)容 細胞克隆的概念與意義 細胞系 細胞克隆 細胞株 直接從機體取材的細胞 、 組織或器官所做的原代培養(yǎng) ， 進行傳代培養(yǎng)后形成的一群生物學特征不均一的細胞便稱為 細胞系 (cell line ) 。 ? 有限細胞系 （ Finite Cell Line） ? 無限細胞系 （ Infinite Cell Line） 一個克隆的細胞群體是從一個單一母細胞繁殖而來 。 分離單一細胞并使其繁殖為一細胞群體的方法成為 細胞的克隆化 （ cloning） 。 從原代培養(yǎng)物或細胞系中分離單個細胞進行培養(yǎng) ， 形成均一的細胞群 ， 這群細胞具有一定的生物學特性和遺傳標記 ， 并在繼代培養(yǎng)中仍能保持其特性和標記 ， 這群細胞就稱為 細胞株 (cell strain)。 植物單細胞培養(yǎng)技術(shù) 愈傷組織誘導(dǎo) 平板培養(yǎng) 看護培養(yǎng) 微室培養(yǎng) 其他改進培養(yǎng)技術(shù) 愈傷組織誘導(dǎo) 誘導(dǎo)獲得的愈傷組織可以用鑷子或小刀分割得到植物小細胞團 ， 也可以將愈傷組織轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基中 ， 加入經(jīng)過殺菌處理的玻璃珠 ， 進行振蕩培養(yǎng) ， 使愈傷組織分散成為小細胞團或單細胞 ，然后用適當孔徑的不銹鋼篩網(wǎng)過濾 ， 除去大細胞團和殘渣 ， 得到一定體積的小細胞團或單細胞懸浮液 。 平板培養(yǎng) 所謂 平板培養(yǎng) （ plating culture） 是指將一定密度的懸浮細胞接種到一薄層固體體培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)的技術(shù) 。 1. 單細胞的分離：一般采用酶分離法 ， 小細胞團不能超過 6個細胞 ， 因此過濾時網(wǎng)篩的網(wǎng)眼要選擇合適 。 2. 單細胞懸浮液的制備：分離的單細胞經(jīng)培養(yǎng)基洗滌 2次以后 ， 調(diào)整密度為 5 105/ml。 3. 植板：將 1份已調(diào)整好密度的但細胞懸浮液與 4份35℃ 的固體培養(yǎng)基充分混合均勻 ， 然后均勻的平鋪與培養(yǎng)皿中 ， 其厚度為 5mm左右 。 平板培養(yǎng)的效果一般用 植板率 來衡量。植板率是能長出細胞團的單細胞在接種單細胞中所占的比例。 看護培養(yǎng) 看護培養(yǎng) （ nurse culture） 技術(shù)首先是有 Muir等 （ 1954） 設(shè)計的 ， 其操作方法是在固體培養(yǎng)基上置入一塊活躍生長的愈傷組織 ， 再在愈傷組織上放一小片濾紙 ， 待濾紙濕潤后將細胞接種于濾紙上 。當培養(yǎng)細胞長出微小細胞團以后 ， 將其直接轉(zhuǎn)至瓊脂培養(yǎng)基上讓其迅速生長 。 微室培養(yǎng) 微室培養(yǎng) （ microchamber culture） 是為進行單細胞活體連續(xù)觀察而建立的單細胞培養(yǎng)技術(shù) ， 運用這種技術(shù)可對單細胞的生長與分化 、 細胞分裂的全過程 、 胞質(zhì)環(huán)流的規(guī)律等進行活體連續(xù)觀察 。 這一方法同樣也可用于原生質(zhì)體培養(yǎng) ， 用于觀察細胞壁的再生與細胞分裂過程 。 微室培養(yǎng)是細胞學研究的優(yōu)良實驗體系 。 微室培養(yǎng)首先是由 Jones等在 1960年設(shè)計的 。 其他改進培養(yǎng)技術(shù) Horsch等 （ 1980） 將平板培養(yǎng)與飼養(yǎng)層培養(yǎng)技術(shù)相結(jié)合 ， 建立了 雙層濾紙植板培養(yǎng) 方法 ， 該方法是在培養(yǎng)皿中倒入瓊脂培養(yǎng)基凝固后 ， 先將飼養(yǎng)細胞平鋪在培養(yǎng)基上 ， 然后在飼養(yǎng)細胞層上平展一張濾紙形成看護層 ， 再將濾紙制成的圓碟置于看護層上 ， 然后將培養(yǎng)細胞植于其中 。 動物細胞克隆技術(shù) 原代培養(yǎng) 繼代
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