植物細胞工程課件第三章細胞克隆與種子細胞篩選-展示頁
2025-01-29 07:37本頁面
【正文】 在 1218h的細胞類型接種密度以2 104/ml為宜 。 適用細胞 具有非貼壁特性的細胞 ， 如血細胞 、 腹水細胞等 ， 或者通過機械攪拌和振蕩能夠較好地維持懸浮狀態(tài)的細胞 。 1. 將解離獲得的細胞沉淀 2. 用培養(yǎng)液配制成需要的細胞懸液 3. 接種到培養(yǎng)瓶內(nèi) 4. 水平放置 ， 37℃ 下靜止培養(yǎng) 5. 每隔 12天換培養(yǎng)液一次 6. 培養(yǎng)一定時間后 ， 細胞在培養(yǎng)瓶底即形成一單細胞層 。 培養(yǎng)方法 組織塊培養(yǎng) 1. 將組織剪切成碎塊 2. 用平衡鹽溶液漂洗 3. 在解剖鏡下切除脂肪 、 壞死組織等 4. 切成 1mm3大小 5. 再漂洗 23次 6. 轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng) 。 ? 一般直接用鑷子、解剖刀解剖組織、器官，然后加以整理用于培養(yǎng)。 動物細胞克隆技術(shù) 原代培養(yǎng) 繼代培養(yǎng) 單細胞克隆 原代培養(yǎng) primary culture 取材 培養(yǎng) ? 組織解離 ? 機械分離 取材 ? 解離一般是借助酶和鰲合劑處理組織，使其成為分散的細胞。 微室培養(yǎng)首先是由 Jones等在 1960年設(shè)計的 。 這一方法同樣也可用于原生質(zhì)體培養(yǎng) ， 用于觀察細胞壁的再生與細胞分裂過程 。當(dāng)培養(yǎng)細胞長出微小細胞團以后 ， 將其直接轉(zhuǎn)至瓊脂培養(yǎng)基上讓其迅速生長 。植板率是能長出細胞團的單細胞在接種單細胞中所占的比例。 3. 植板：將 1份已調(diào)整好密度的但細胞懸浮液與 4份35℃ 的固體培養(yǎng)基充分混合均勻 ， 然后均勻的平鋪與培養(yǎng)皿中 ， 其厚度為 5mm左右 。 1. 單細胞的分離：一般采用酶分離法 ， 小細胞團不能超過 6個細胞 ， 因此過濾時網(wǎng)篩的網(wǎng)眼要選擇合適 。 植物單細胞培養(yǎng)技術(shù) 愈傷組織誘導(dǎo) 平板培養(yǎng) 看護培養(yǎng) 微室培養(yǎng) 其他改進培養(yǎng)技術(shù) 愈傷組織誘導(dǎo) 誘導(dǎo)獲得的愈傷組織可以用鑷子或小刀分割得到植物小細胞團 ， 也可以將愈傷組織轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基中 ， 加入經(jīng)過殺菌處理的玻璃珠 ， 進行振蕩培養(yǎng) ， 使愈傷組織分散成為小細胞團或單細胞 ，然后用適當(dāng)孔徑的不銹鋼篩網(wǎng)過濾 ， 除去大細胞團和殘渣 ， 得到一定體積的小細胞團或單細胞懸浮液 。 分離單一細胞并使其繁殖為一細胞群體的方法成為 細胞的克隆化 （ cloning） 。細胞克隆與種子細胞篩選 第三章 細胞工程電子課件 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院 細胞克隆的概念與意義 植物單細胞培養(yǎng)技術(shù) 動物細胞克隆技術(shù) 種子細胞篩選 主要內(nèi)容 細胞克隆的概念與意義 細胞系 細胞克隆 細胞株 直接從機體取材的細胞 、 組織或器官所做的原代培養(yǎng) ， 進行傳代培養(yǎng)后形成的一群生物學(xué)特征不均一的細胞便稱為 細胞系 (cell line ) 。 ? 有限細胞系 （ Finite Cell Line） ? 無限細胞系 （ Infinite Cell Line） 一個克隆的細胞群體是從一個單一母細胞繁殖而來 。 從原代培養(yǎng)物或細胞系中分離單個細胞進行培養(yǎng) ， 形成均一的細胞群 ， 這群細胞具有一定的生物學(xué)特性和遺傳標(biāo)記 ， 并在繼代培養(yǎng)中仍能保持其特性和標(biāo)記 ， 這群細胞就稱為 細胞株 (cell strain)。 平板培養(yǎng) 所謂 平板培養(yǎng) （ plating culture） 是指將一定密度的懸浮細胞接種到一薄層固體體培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)的技術(shù) 。 2. 單細胞懸浮液的制
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