植物細(xì)胞工程課件第三章細(xì)胞克隆與種子細(xì)胞篩選-文庫吧資料
2025-01-26 07:37本頁面
【正文】 細(xì)胞的培養(yǎng) A 斷尾（或剪腮）放血 B 用 ％高錳酸鉀溶液或 70％的乙醇浸泡消毒 30分鐘。 細(xì)胞透明 ， 顆粒少 ， 界線清 。在無污染時 ， 24h內(nèi)有細(xì)胞貼壁 ， 圓形懸浮狀的細(xì)胞延展成短梭狀 。 細(xì)胞觀察 ? 如見培養(yǎng)液變?yōu)辄S色且又混濁 ， 為污染 。 810min, 取上清加入適量培養(yǎng)液 ,細(xì)胞計數(shù)后分裝； (板 )上標(biāo)明細(xì)胞名稱，代數(shù)，日期； 37℃ 孵箱中培養(yǎng)。 ,顏色略白時，取出置于超凈工作臺內(nèi) . 胰蛋白酶消化 ,使大部分組織塊分散成細(xì)胞團(tuán)或單個細(xì)胞狀態(tài)。 乳鼠腎細(xì)胞原代培養(yǎng) a. 采用頸椎脫臼法 ， 將一只新生乳鼠處死 b. 將 小 鼠 放 入 盛 有 酒 精 的 燒 杯 中 數(shù) 秒 c. 置超凈工作臺內(nèi) d. 打開消毒器械包 用鑷子掀起乳鼠腹部皮膚 ,用 解 剖 剪 剪 開 腹 腔 , 充 分 暴 露 腹 腔 e. 用另一鑷子輕輕夾起腸管 ,翻置一側(cè) ,充分暴露位于腹腔背壁脊柱 f. 取下雙側(cè)腎臟 ,放入消毒培養(yǎng)皿中 g. 用吸管吸取 PBS加入培養(yǎng)皿中 ,清洗腎臟 3次 ,盡量去掉血污 . h. 將腎組織用解剖剪剪成幾塊，再用 PBS漂洗，去凈血液 . ,用眼科剪剪切至 。 切取擬培養(yǎng)的動物器官或大組織塊 洗去血污 剔除多余成分 切成約 1mm3大小的組織塊 將所有組織剪碎 用于組織培養(yǎng) 蛋白酶溶液消化 機(jī)械方法吹打組織塊 離心、培養(yǎng)液懸浮 計數(shù)、調(diào)節(jié)細(xì)胞密度 用于分離細(xì)胞培養(yǎng) 動物細(xì)胞的培養(yǎng)步驟 例 1 乳鼠腎細(xì)胞原代培養(yǎng) 準(zhǔn)備工作 A． 培養(yǎng)用品消毒后，安放在超凈工作臺內(nèi)，紫外線消毒，做好洗手等準(zhǔn)備工作。 ?EDTA溶 液 洗 滌 用 PBS配制 1mmoll1d EDTA， 棄去原代培養(yǎng)的培養(yǎng)液 ， 轉(zhuǎn)入 EDTA洗滌細(xì)胞 ， 然后再用 %的胰蛋白酶消化 ， 次法用于貼壁性極強(qiáng)的細(xì)胞獲取 。 基本方法 與植物細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)相似 繼代培養(yǎng) subculture ?單層細(xì)胞培養(yǎng) 貼壁細(xì)胞再培養(yǎng) ?懸浮培養(yǎng) 非貼壁細(xì)胞培養(yǎng) 從原代培養(yǎng)物中解離細(xì)胞： ?震蕩法 在培養(yǎng)瓶中加入平衡鹽溶液 ， 輕輕震動培養(yǎng)瓶 ， 可以使貼壁疏松的細(xì)胞進(jìn)入到溶液內(nèi) ， 然后收集洗滌用于培養(yǎng) 。 接種密度與細(xì)胞倍增時間有關(guān) ， 倍增時間在 2448h的細(xì)胞類型接種密度以 105/ml細(xì)胞為宜 ，倍增時間
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