植物細胞工程課件第三章細胞克隆與種子細胞篩選-閱讀頁
2025-02-04 07:37本頁面
【正文】 然后再取單個細胞群落進行再培養(yǎng) 。 種子細胞篩選 種子細胞的概念及意義 選擇壓篩選 細胞誘變 種子細胞的概念及意義 ? 適用于工業(yè)化生產(chǎn)的種子細胞，必須滿足以下幾個基本條件： ? 分散性好； ? 均一性好； ? 生長迅速； ? 細胞中次生產(chǎn)物含量高； ? 細胞生長和次生產(chǎn)物合成能力穩(wěn)定。 植物細胞選良和改良方法 ? 篩選 ? 誘變 小細胞團篩選法 選擇壓力篩選法 選擇壓篩選 選擇壓力篩選法是通過添加某些對不同的細胞有不同作用效果的物質(zhì) ， 淘汰部分敏感細胞 ， 而選擇得到所需的細胞的選育方法 。 ?正選擇 就是把受選擇的細胞群體置于一定的選擇壓力下，部分細胞在選擇壓力的作用下受到淘汰，而有一些耐受抗選擇壓力的細胞可以生長，從而選擇得到所需的細胞。 如以 NaCl為選擇劑選擇耐鹽突變體，以除草劑為選擇劑選擇抗除草劑突變體等。 一步選擇法有利于篩選單基因突變的細胞，而對于遺傳背景不詳且可能是多基因的突變或是細胞質(zhì)基因突變，采用多步法為好。在植物細胞篩選中，常用致死富集法。 ?負選擇適用于對營養(yǎng)缺陷型突變體的選擇。 ?還必須注意染色體的倍數(shù)性水平和培養(yǎng)細胞再生植株的能力。 細胞生長速度對細胞篩選效果的影響 ?某些抗代謝產(chǎn)物在培養(yǎng)基中只有很短的半衰期 。 因此 ， 敏感的變異體可能在不允許其生長的條件下存活下來 。 選擇壓力施加方式對細胞篩選效果的影響 ?選擇壓力可一次性施加 ， 也可逐步施加 。 ?但在另一些情況下 ， 選擇壓力的施加方式直接影響到選擇的成敗 。 是獲得優(yōu)良植物細胞的有效方法之一 。 ? 物理誘變劑：包括 X射線 、 γ射線 、 中子 、 α粒子 、 β粒子 、 紫外線等 。 ? 物理誘變劑處理方法：外照射；內(nèi)照射 。 又分為急照射和慢照射 。 常用的方法有浸泡法 、 注射法和飼入法 。 此外一些抗菌素也可作為誘變劑 。 如 5溴尿嘧啶 。 如馬來酰阱 、 重氮比氨酸 、 絲裂霉素 C、鏈霉素 C等 。 化學誘變劑 誘變的基本過程 單細胞制備 預培養(yǎng) 誘發(fā)突變 篩選突變株 材料的選擇 預處理 細胞材料的制備 制備細胞懸浮液 （一）制備單細胞 ?用于突變體篩選的最理想的材料是單細胞或原生質(zhì)體 ， 也可用莖尖 、 腋芽等 。 材料的選擇 ?采用誘變劑進行化學誘變處理 。 預處理 ?分離植物器官 、 誘導形成愈傷組織 、 液體培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng) ， 獲得小細胞團和單細胞的懸浮培養(yǎng)物 。 細胞材料的制備 ?經(jīng)預處理的材料用糖液洗凈備用 。 制備細胞懸浮液 （二）預培養(yǎng) ?單細胞或愈傷組織經(jīng)誘變劑和酶處理后活力下降 ， 必須進行預培養(yǎng) 。 （三）誘發(fā)突變 ?誘發(fā)突變一般采用平板培養(yǎng)法 ， 并在培養(yǎng)基中加入某種選擇因子 ， 長時間飼喂培養(yǎng)植物細胞 ， 使其發(fā)生擬定目標的突變 ， 反復飼喂需數(shù)月時間 。 （四）突變細胞的選擇 ?將在具有選擇因子的培養(yǎng)基中培養(yǎng)數(shù)月的細胞團 ， 轉(zhuǎn)入不加選擇因子的培養(yǎng)基中培養(yǎng) ，脫除選擇因子 。 ?根據(jù)期望篩選的突變體特性 ， 向培養(yǎng)基中加入一些脅迫因素 ， 如病菌毒素 、 鹽類 、除莠劑 、 氨基酸類似物等 ， 把細胞接種到這些培養(yǎng)基上培養(yǎng) ， 結(jié)果會發(fā)現(xiàn) ， 多數(shù)正常細胞不能生長而死亡 ， 而個別突變細胞則繼續(xù)生長 ， 形成細胞團 。 ? 突變后具備的特點： 1. 離開選擇壓后變異表型保持穩(wěn)定； 2. 自然變異表型發(fā)生頻率低； 3. 突變體中具有相應變化了的基因產(chǎn)物或生理生化代謝上的差異； 4. 變異表型能夠通過有性繁殖
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