第十章蛋白質(zhì)和氨基酸的測(cè)定第一節(jié)概述-資料下載頁
2024-10-11 11:38本頁面
【導(dǎo)讀】蛋白質(zhì)是含氮的有機(jī)化合物，分子量很大。要由C、H、O、N、S五種元素組成。中還含有微量的P、Cu、Fe、I等。這里也包括非蛋白的。蛋白氮多的要單測(cè)）。無論動(dòng)物、植物都含有蛋白質(zhì)，只是含量及類型不同。分解產(chǎn)物直接影響食品的色、香、味。堿性基因以及芳香基團(tuán)等測(cè)定蛋白質(zhì)含量。凱氏定氮法——最常用的，國內(nèi)外應(yīng)用普遍。氨基酸總量——酸堿滴定法測(cè)定。各種氨基酸的分離與定量——色譜技術(shù)。有多種氨基酸分析儀。書中列舉了5種染料。例如牛肉中蛋白質(zhì)含量為%左右，豬肉%，兔肉21%，雞肉20%，牛乳%，帶魚%，大豆40%，制均具有極其重要的意義。微量、自動(dòng)定氮儀法，半微量法及改良凱氏法。據(jù)標(biāo)準(zhǔn)酸消耗量可以計(jì)算出蛋白質(zhì)的含量。吸收后再以標(biāo)準(zhǔn)NaOH滴定過量的酸。許水，后加水稀釋至50ml,靜置后，取其澄清液，樣5m1的比例增加硫酸用量。時(shí)，需適當(dāng)延長消化時(shí)間。氫氧化銅在70～90℃時(shí)發(fā)黑?？捎?jì)算總氮百分含量并記錄，12. 分鐘完成1個(gè)樣。
【正文】 10 cm，且分離效果好。 ② 層析后得到的斑點(diǎn)小而清晰。 ③ 能夠使用多種顯色劑。 ④ 點(diǎn)樣量少，靈敏度高。（比紙層析高 10— 100倍） 精確到 。 ⑤ 也可用于大量分離＞ 500 mg，作為樣品制備層析。 ? 缺點(diǎn)： Rf值重現(xiàn)性比紙上層析差 。 ? 分類：按層析的原理可分為：吸附 、 分配 、離子交換 、 凝膠等 。 （三）操作方法： ① 薄層板制備 ② 樣品液制備 ③ 點(diǎn)樣：距薄板底端 2cm處，用針畫一標(biāo)記作為 原點(diǎn)。再以點(diǎn)樣距扳子寬窄可點(diǎn)幾個(gè)點(diǎn)同時(shí) 展開，點(diǎn)與點(diǎn)之間間隔 1～ 2cm。 、微量吸管或微量注射器。注 意要等一個(gè)點(diǎn)干了再點(diǎn)另一個(gè)點(diǎn)。 ф3 mm 濾紙片，浸入樣液，埋到 板子上先挖好一個(gè)小洞穴。 ④ 展開：點(diǎn)樣完了 ， 放入密閉容器中 （ 展開槽 ） ， 傾斜一定角度 10～ 30176。 ， 下端浸入展開劑 1cm， 千萬別讓溶劑浸過了樣點(diǎn) 。 到離頂端一部分 ， 取出樣板 、 晾干 、 顯色 。 ：主要是低沸點(diǎn)的 2～ 3種有機(jī)溶劑組成的溶劑系統(tǒng) ， 分離效果主要決定于展開劑的選擇 ， 因?yàn)槲絼┰谝欢ㄇ闆r下是恒定的 ，吸附劑的選擇余地遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于展開劑的選擇 。 ： Ⅰ .微量圓環(huán)法 。 Ⅱ .用小載波片試驗(yàn) ， 微量展開劑展開 5cm。 Ⅲ .圖解法： 樣品極性小 ， 選吸附劑活性高 ， 展開劑極性低的 。 樣品極性大 ， 選吸附劑活性低 ， 展開劑極性高 。 ? 有機(jī)溶劑極性由小到大為： 石油醚 、 環(huán)己烷 、 四氯化碳 、 三氯乙烷 、 甲苯 、苯 、 二氯甲烷 、 氯仿 、 乙醚 、 乙酸乙酯 、 丙酮 、正丙醇 、 乙醇 、 甲醇 、 水 、 吡啶 、 有機(jī)酸類等 。 ： 上行法 、 下行法 、 雙向展開 、 單向多次展開 、 雙向多次展開 。 雙向展開： ⑤ 顯色： ，使斑點(diǎn)顯色，即噴霧顯色。 ，在紫外光下觀察斑點(diǎn)。 。 （涂板時(shí)把 熒光指示劑加入到固體吸附劑中） 定性：在同一塊板上 ， 同等條件下操作 ， 被測(cè)樣與標(biāo)準(zhǔn)樣同時(shí)展開 、 顯色 ， 同 Rf 值即是； 查手冊(cè)找相同的 Rf 值 。 定量： ：以標(biāo)準(zhǔn)斑點(diǎn)對(duì)照 ， 相當(dāng)于樣品斑點(diǎn)中含量 ug數(shù) 。 。 ， 定容 ， 離心 ， 比色 。 ： 例：日本島津 CS—— 910 型雙波長薄 層色譜掃描儀 介紹離心薄層色譜儀： 1. LBG — 1型離心薄層色譜儀 北京產(chǎn) 2. 7924型離心薄層色譜儀 美國 Harrison 公司研制 3. CLC — 5型離心制備液體色譜儀（日本日立公司，帶紫外檢測(cè)器、記錄器和自動(dòng)收集器，制備量可達(dá) 10g 。 二 ． 氨基酸自動(dòng)分析儀法 三 ． 氣相色譜法 四 ． 高效液相色譜法 103 第十章的重點(diǎn) 1. 凱氏定氮法原理、分步、測(cè)定方法。 2. 雙縮脲法測(cè)定原理。 3. 氨基酸總量的測(cè)定方法（甲醛滴定法）。 4. TLC法原理、方法， Rf值的作用及計(jì)算方法。
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