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蛋白質(zhì)與氨基酸-資料下載頁

2024-10-09 15:54本頁面
  

【正文】 轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白)、貯存蛋白、運(yùn)動(dòng)蛋白、保護(hù)或防禦蛋白、受體蛋白、控制生長(zhǎng)和分化蛋白、毒蛋白、膜蛋白等。 ( passive protein) 對(duì)生物體起支援和保護(hù)作用,主要指硬蛋白包括膠原蛋白、角蛋白、絲蛋白、彈性蛋白等。 五、蛋白質(zhì)的架構(gòu) 當(dāng)多肽的分子量大到足夠具有一定的空間架構(gòu)時(shí)就稱為蛋白質(zhì)。 蛋白質(zhì)與多肽的主要 差別 ︰ 分子量,空間架構(gòu) 為了對(duì)蛋白質(zhì)架構(gòu)敘述的方便,人為地將蛋白質(zhì)的架構(gòu)分為一級(jí)架構(gòu)、二級(jí)架構(gòu)、三級(jí)架構(gòu)和四級(jí)架構(gòu)。 蛋白質(zhì)的一級(jí)架構(gòu)又稱初級(jí)架構(gòu),二級(jí)架構(gòu)、三級(jí)架構(gòu)、四級(jí)架構(gòu)的三度空間排列稱蛋白質(zhì)的空間架構(gòu)、進(jìn)階架構(gòu)、三維架構(gòu)或構(gòu)象。 隨著蛋白質(zhì)化學(xué)研究的進(jìn)展,越來越多的人認(rèn)為在二級(jí)架構(gòu)和三級(jí)架構(gòu)之間應(yīng)加入超二級(jí)架構(gòu)和架構(gòu)域這兩個(gè)層次,所以蛋白質(zhì)的架構(gòu)層次為 ︰ 一級(jí)架構(gòu) 二級(jí)架構(gòu) 超二級(jí)架構(gòu) 架構(gòu)域 三級(jí)架構(gòu) 四級(jí)架構(gòu) (一)蛋白質(zhì)的一級(jí)架構(gòu)( primary structure) 1.定義 ︰ 蛋白質(zhì)的一級(jí)架構(gòu)是指蛋白質(zhì)多肽鏈中氨基酸的排列順序( sequence),一級(jí)架構(gòu)的主要連接鍵是肽鍵。 2.蛋白質(zhì)一級(jí)架構(gòu)的測(cè)定 概況 : 序列測(cè)定前的準(zhǔn)備工作 ︰ 樣品的純度 相對(duì)分子質(zhì)量 鏈的數(shù)目 氨基酸組成 一級(jí)架構(gòu)的測(cè)定主要用 小片段重疊 的原理 序列測(cè)定方法 ( 1)末端分析 ︰ 包括 N端分析, C端分析 N端分析方法 二硝基氟苯法( DNP法、 DNFB法或 FDNB法) 丹磺醯氯法( DNS法) 氨肽酵素( aminopeptidase, Apase) 法 Ala Val Gly 亮氨酸氨 肽 酵 素 ( Leucine amino peptidase, LAP) 專一性 : A=非極性氨基酸時(shí) 快 A=其它氨基酸時(shí) 慢 A B N端 A=Leu時(shí) 最快 C端分析 硼氫化鋰還原法 H N C H C O O HRL i B H 4H N C H C H 2 O HR水 解混 合 氨 基 酸 H 2 N C H C H 2 O HR+C 端 羧肽酵素( carboxypeptidase, Cpase) 法 4種羧肽酵素的來源和專一性 羧 酵 來源 專一性 CpA 胰臟 能釋放除 pro、 Arg和 Lys以外的所有 C端氨基酸 CpB 胰臟 主要水解 C端為 Arg或 Lys的 鍵 CpC 植物或微生物 相當(dāng)廣泛 , 幾乎能釋放 C端的所有氨基酸 CpY 麵包酵母 可釋放 C端所有氨基酸 ( 2)肽鏈的拆開和分離 共價(jià)鍵 非共價(jià)鍵 ( 3)肽鏈的部分水解 化學(xué)方法 ︰ 溴化氰( CNBr) 裂解法 : 酵 素分 解方法 ( 4) 短肽段的分離和氨基酸序列測(cè)定 ( 5)找重疊肽從而推斷整個(gè)肽鏈的氨基酸序列 ( 6)雙硫鍵位置的確定 對(duì)角線電泳 ( 7)醯胺基位置的確定 3.蛋白質(zhì)測(cè)序舉例 insulin 4.指紋圖譜( finger print) 法 近年來由於 DNA序列的測(cè)定發(fā)展很快,可將相應(yīng)於蛋白質(zhì)的 DNA序列測(cè)定出來後,推出蛋白質(zhì)的序列,為蛋白質(zhì)一級(jí)架構(gòu)的測(cè)定帶來了新的曙光。 一級(jí)架構(gòu)測(cè)定展望
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