氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)-資料下載頁(yè)
2025-05-07 18:01本頁(yè)面
【正文】 ）氫鍵 ? （ 2）鹽鍵 ? （ 3）疏水作用力 ? （ 4） Van der Waals力 ? （ 5）二硫鍵 四級(jí)結(jié)構(gòu)（ quaternary structure） ? 四級(jí)結(jié)構(gòu)：由 兩條或兩條 以上具有 三級(jí)結(jié)構(gòu)的多肽 鏈通過疏水作用力、鹽鍵等次級(jí)鍵相互締合而成。 ? 每一個(gè)具有三級(jí)結(jié)構(gòu)的多肽鏈稱為 亞基 （ subunit）。 ? 在蛋白質(zhì)分子中，亞基的立體排布、亞基間相互作用與接觸部位的布局稱為四級(jí)結(jié)構(gòu)（ quaternary structure）。 ? 四級(jí)結(jié)構(gòu)不包括亞基內(nèi)部的空間結(jié)構(gòu) ? 亞基：一般多為偶數(shù) ? 為 2～ 10個(gè)時(shí)，是較小的蛋白質(zhì) ? 多的可達(dá)上千個(gè) 四、蛋白質(zhì)的理化性質(zhì) ?（一）蛋白質(zhì)的兩性電離和等電點(diǎn) ?（二）蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì) ?（三）蛋白質(zhì)的變性 ?（四）蛋白質(zhì)的沉淀 ?（五）蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng) （一）蛋白質(zhì)的兩性電離和等電點(diǎn) pH ＜ pI pH=pI pH＞ pI 陽(yáng)離子 電中性 陰離子 P rC O O N H 2H +O H H +O H P r C O ON H 3 +P rC O O HN H 3 +（二）蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì) ? 蛋白質(zhì)的分子量：有的可達(dá)數(shù)千萬 ? 水中形成的顆粒直徑： 1～ lOOnm ? 有膠體溶液的性質(zhì)，不能通過半透膜 ? 可用半透膜將蛋白質(zhì)與小分子物質(zhì)分離而得以純化 ? 這種方法稱為 透析法 ? 透析法 是實(shí)驗(yàn)或工業(yè)生產(chǎn)上提取和純化蛋白質(zhì)常用的方法 （三）蛋白質(zhì)的變性 ? 是指蛋白質(zhì) ? 在某些 物理或化學(xué) 因素的作用下 ? 其空間結(jié)構(gòu)遭到破壞 ? 致使 蛋白質(zhì)生物活性喪失 和 理化性質(zhì)改變 引起蛋白質(zhì)變性的因素 ?物理因素有：加熱 、 紫外線照射 、 超聲波和劇烈振搖等 ?化學(xué)因素有：強(qiáng)酸 、 強(qiáng)堿 、 有機(jī)溶劑 、 重金屬鹽等 變性蛋白質(zhì) (denatured protein) ?變性作用并不破壞蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu) ?變性蛋白質(zhì)的表現(xiàn)： ?首先是 失去生物活性 。 如血紅蛋白失去運(yùn)輸氧的功能 ， 胰島素失去調(diào)節(jié)血糖的功能 ， 酶失去催化能力等 ?其次是 各種理化性質(zhì)的改變 。 如溶解度降低 ， 易于沉淀等 。 變性蛋白質(zhì)（ 2種） ? 可逆變性 ? 當(dāng)變性蛋白質(zhì)去掉變性因素后 ， 能恢復(fù)原有性質(zhì) ， 這種變性稱為 可逆變性 或稱 復(fù)性 ? 不可逆變性 胃蛋白酶 ?加熱到 80℃ ～ 90℃ ?就失去其消化蛋白質(zhì)的功能 ?當(dāng)把溫度回調(diào)到 37℃ ，則其功能又可恢復(fù)。 ?目前很多蛋白質(zhì)變性后尚不能復(fù)性，如機(jī)體衰老時(shí)的蛋白質(zhì)變性尚屬不可逆過程。 變性作用的實(shí)際意義 ? 一是 防止蛋白質(zhì)激素、酶、抗體、疫苗等活性蛋白質(zhì)在生產(chǎn)和保存過程中變性，以保持其生物活性 ? 二是變性原理可用于滅菌等 鄧健 制作 張魯雁 審校 76 （四）蛋白質(zhì)的沉淀 調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)溶液的 pH值至等電點(diǎn) , 再加入適當(dāng)?shù)拿撍畡┏サ鞍踪|(zhì)分子表面的水化膜 , 可使蛋白質(zhì)分子聚集而從溶液中沉淀析出。 沉淀蛋白質(zhì)的方法： ?鹽析 常用 (NH4)2SO Na2SO NaCl、 MgSO4等 ?有機(jī)溶劑 常用甲醇 、 乙醇 、 丙酮等親水性溶劑 ?重金屬鹽 常用 Ag+、 Cu2+、 Pb2+ 等 ?常用的酸 ： 苦味酸 、 鎢酸 、 三氯乙酸 、 磺基水楊酸等 上頁(yè) 下頁(yè) 首頁(yè) 鹽析法 （ salting out） ? 鹽析法 是指加鹽使蛋白質(zhì)沉淀析出現(xiàn)象的方法。即， ? 分段鹽析法 是指調(diào)節(jié)鹽濃度可使混合蛋白質(zhì)先后析出的方法。 ? 常用的中性鹽：硫酸銨、氯化鈉等 ? 原理：破壞蛋白質(zhì)膠體周圍的水化膜 ? 中和了蛋白質(zhì)分子的電荷 ? 一般用鹽析沉淀出來的蛋白質(zhì)不變性。 ? 血清中加硫酸銨至 50％飽和度，則 球蛋白 先沉淀析出， 加硫酸銨至飽和，則 清蛋白 沉淀析出 加有機(jī)溶劑 ? 有：乙醇、丙酮等 ? 原理：由于這些溶劑對(duì)水的親和力強(qiáng)于蛋白質(zhì)分子而破壞了蛋白質(zhì)周圍的水化膜，使蛋白質(zhì)沉淀 ? 在蛋白質(zhì)的 pI時(shí)，加入這些溶劑則沉淀效果更好 加重金屬鹽 ? 有：硝酸銀、醋酸鉛及氯化高汞等 ? 原理：這是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)在 pHpI的溶液中帶負(fù)電荷，可與這些重金屬正離子結(jié)合成不溶性的蛋白鹽而沉淀。 加生物堿試劑 ? 有：苦味酸、三氯醋酸、鞣酸和磺柳酸等 ? 原理：這是由于蛋白質(zhì)在 pHpI的溶液中帶正電荷，可與這些有機(jī)酸根結(jié)合成不溶性的蛋白鹽而沉淀。 反應(yīng)名稱 試劑 顏色 作用基團(tuán) 縮二脲反應(yīng) 強(qiáng)堿、稀硫酸銅溶液 紫色或紫紅色 肽鍵 茚三酮反應(yīng) 稀茚三酮溶液 藍(lán)紫色 氨基 蛋白黃反應(yīng) 濃硝酸、再加堿 深黃色或橙紅色 苯環(huán) Millon反應(yīng) 硝酸亞汞、硝酸汞和硝酸混合液 紅色 酚羥基 亞硝酰鐵氰化鈉反應(yīng) 亞硝酸鐵氰化鈉溶液 紅色 巰基 (五 ) 蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng) 第四節(jié) 酶的化學(xué) 酶的定義 : 酶的結(jié)構(gòu)特點(diǎn) (4點(diǎn) ) 酶的催化效能 (三點(diǎn) ) 酶催化的立體專一性 蛋白組學(xué) PS1平臺(tái) ? Proteomics Solution I System SymBiot I 自動(dòng)加樣系統(tǒng) MALDI－ TOF 質(zhì)譜儀 特點(diǎn) ? DE技術(shù) ? 借助反射鏡使飛行長(zhǎng)度增加到 2m，提高了質(zhì)量分辯率和測(cè)量結(jié)果的 準(zhǔn)確性 ? 反射鏡校正了在離子源時(shí)離子的初始速度分布，減小了相同質(zhì)量的離子在動(dòng)能上的差別 ? VoyagerDEPRO使離子通過反射鏡后并在源后裂解 PSD進(jìn)行肽的測(cè)序，獲得真實(shí)的 MS/MS數(shù)據(jù) ? 可通過碰撞誘導(dǎo)解離 (CID)來增加裂解的程度，從而獲得更多的結(jié)構(gòu)信息 ? 包括操作和數(shù)據(jù)系統(tǒng)軟件：自動(dòng)調(diào)整儀器、采集數(shù)據(jù)、處理數(shù)據(jù)、打印報(bào)告 應(yīng)用 ? 蛋白質(zhì)精確分子量測(cè)定 ? 差異表達(dá)蛋白樣品的鑒定 ? 重組蛋白藥物的肽圖分析 ? 理論肽庫(kù)構(gòu)建及實(shí)際肽圖比對(duì)分析 Data Explorer software Data Explorer software PMF中的同位素峰 AutoMS－ Fit 檢索報(bào)告 操作流程圖 2DGEL Image 樣品制備 2D Gel 電泳 圖象分析 差異點(diǎn) MS鑒定 已知 未知??？
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